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β―catenin在原发性肝细胞癌中表达及其临床意义 　　[摘要] 目的 探讨肝细胞癌肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）β-catenin的表达与HCC临床病理特征的关系。方法 应用Envsion法检测333例HCC，168例癌旁肝组织及89例正常肝组织的β-catenin表达；RT-PCR检测37例HCC及癌旁组织，肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞株LO2的β-catenin mRNA表达。结果 β-catenin在HCC胞质、胞核的阳性表达率为79%/37%；在癌旁和正常肝组织中的表达率为72%/0%、70%/0%。差异均有统计学意义（P均0.05）。且分化好的癌细胞表达低，分化差的细胞表达高。同时，HCC和HepG2的β-catenin mRNA表达高于癌旁组织及LO2的表达。结论 肝细胞癌的β-catenin过表达提示其在癌的发生过程中可能起着促癌的作用。 　　[关键词] β-catenin；肝细胞癌；组织芯片；免疫组织化学；RT-PCR 　　[中图分类号] R735.7 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）13-0031-04 　　Wnt/β-catenin信号途径调节控制着许多生命过程，包括生物体的生长、发育、疾病、衰老与死亡等。同时，Wnt/β-catenin信号途径也与肿瘤的发生密切相关，有十几种目前已知的高发性癌变源于Wnt/β-catenin信号转导途径的失调[1]。β-catenin是Wnt信号途径中具转录调控活性的关键成员，β-catenin能在细胞核内与Wnt途径的另一类成员LEF1/TCFs 结合从而激活靶基因的转录。β-catenin在正常成体细胞胞浆内含量少，而在肿瘤中常出现胞浆内累积和核内表达。因此，本研究拟通过检测β-catenin在大样本肝细胞癌病例中的表达，并对其阳性表达与肝细胞癌的临床病理特征进行分析，探讨其在肝细胞癌发生和发展中的作用，以期进一步阐明肝细胞癌的发病机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　石蜡标本：收集广州医科大学附属肿瘤医院病理科1998年1月～2008年1月明确诊断的肝细胞癌标本333例、癌旁肝组织168例及正常肝组织89例。每例患者均登记临床病理资料，包括年龄、性别、癌灶大小、HBs-Ag 状态、有无门静脉癌栓形成、血清AFP水平，肿瘤分级情况、TMN分期。 　　组织标本与细胞株：收集广州医科大学附属肿瘤医院2010年～2011年外科手术切除的新鲜肝细胞癌组织及其对应的癌旁非肿瘤组织共37例，其中男32例，女5例，年龄25～73岁，平均50.1岁。肝细胞癌细胞株HepG2，肝正常细胞株LO2均为广州医科大学肿瘤研究所保存。 　　1.2 主要试剂 　　β-catenin抗体（鼠抗人单克隆抗体，美国Transduction laboratories，clone 14），EnvisionTM试剂盒（K5007）购自DAKO公司；TRIzol Reagent（美国invitrogen），RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit（美国MBI）。 　　1.3 方法 　　采用免疫组化Envision法及RT-PCR法进行检测，具体实验步骤参照试剂盒说明进行。 　　1.4 结果判断 　　染色结果判断：β-catenin阳性染色部位为胞膜、胞质和胞核。评分标准采用综合阳性细胞所占百分比和着色强度进行判断[2]。阳性细胞着色程度按轻、中及重度染色分别计为1、2、3分。阳性细胞所占百分比积分如下：0分为阳性细胞比例76%。然后根据两项评分乘积判断结果。 　　RNA结果分析：采用图像分析软件Gensnap对电泳结果进行半定量分析，计算目的基因和内参基因的灰度比值。 　　1.5 统计学分析 　　所有数据均采用SPSS 15.0统计学软件包进行处理。采用χ2检验或Fisher精确检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 β-catenin蛋白的表达 　　β-catenin蛋白在胞膜的阳性表达率是70%（234/333）；在癌旁和正常肝组织的表达率分别是60%（100/168）和65%（58/89）。β-catenin在非癌组织中的膜表达低于在癌组织中的膜表达（封三图4A、C、D）。经统计学分析，肝细胞癌中β-catenin膜的表达与在非肿瘤组织中膜的表达两两比较有显著性差异（癌旁，P=0.000；正常肝组织，P=0.000）； β-catenin胞质的阳性表达率是79%（262/333）；在癌旁和正常肝组织中的表达率分别是72%（122/168）和70%（62/89）。β-catenin在非癌组织中的胞质表达低于在癌