SurvivinHPV16E7蛋白VEGF在宫颈鳞癌及癌前病变中表达及临床意义.docVIP

SurvivinHPV16E7蛋白VEGF在宫颈鳞癌及癌前病变中表达及临床意义 　　[摘要] 目的 探讨Survivin、HPV16-E7蛋白、血管内皮生长因子（VEGF）在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤样病变组织中的表达及在宫颈癌发生、发展中的作用。方法 采用免疫组化SP法检测50例宫颈鳞癌、90例宫颈上皮内瘤变（其中CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各为30例）中Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF的表达，另取正常宫颈者20例为对照组。结果Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变（CINⅡ、CINⅢ）中的表达均随宫颈病变而呈递增趋势（P0.05）。Survivin与HPV16-E7蛋白和VEGF的表达间存在正相关（r=0.417， P0.01；r=0.378， P0.01）。结论Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF与宫颈癌的发生、发展密切相关。 　　[关键词] 宫颈鳞癌；宫颈上皮内瘤变；Survivin；HPV16-E7；VEGF 　　[中图分类号] R737.33 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）08-0101-03 　　宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，其发生率和病死率在女性恶性肿瘤中居第二位[1]。肿瘤的发生、演变、恶化是多基因、多因素、多阶段的过程，其浸润和转移是患者死亡的主要原因。研究表明，宫颈癌的发生、发展是由于致癌因子通过不同机制致使原癌基因激活、抑癌基因失活、细胞增殖及凋亡失调所致[2]。而高危型人乳头瘤病毒（HPV）的感染在宫颈癌的发生中发挥着重要作用[3]。Survivin是一种凋亡抑制基因，该基因表达的Survivin蛋白是迄今为止发现的分子量最小也是抗凋亡作用最强的凋亡抑制蛋白（inhibition apoptosis protein，IAP）。血管内皮生长因子（VEGF）是目前发现的最重要的促血管生长因子，具有促进血管内皮细胞分化、增生、迁移和浸润的作用。本研究应用免疫组化SP法检测Survivin、HPV16-E7蛋白、VEGF 在宫颈鳞癌（squamors cell carcinoma of cervical，SCC）及癌前病变组织中的表达，探讨三者在宫颈癌发生、发展中的作用及相互关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　收集本院2002～2012年手术切除的140例患者石蜡包埋标本，常规取材，所有标本均经病理证实，且确诊前未接受任何治疗。患者年龄22～56岁，中位年龄41岁。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各30例。宫颈鳞癌50例：按 FIGO分期（2009年）：Ⅰb期20例、Ⅱa期30例）；按组织分化程度： 高分化22例， 中分化 12例， 低分化 16例；按有无淋巴结转移：淋巴结转移阳性者19例，淋巴结转移阴性者31例。另取同期因子宫肌瘤、子宫腺肌瘤行全子宫切除术并且术后病理证实为正常宫颈者20例作为对照组。 　　1.2 方法 　　采用SP法进行免疫组化染色。浓缩型兔抗人Survivin多克隆抗体为Neomarker公司产品，鼠抗人HPV16 -E7单克隆抗体为美国 Santa Cruz公司产品，鼠抗人VEGF单克隆抗体、SP试剂盒等均购自福州迈新生物技术开发有限公司。所有标本经10 %多聚甲醛固定，梯度酒精脱水，常规石蜡包埋，制成4 μm厚的连续切片，根据试剂要求进行抗原热修复处理后，采用SP法进行免疫组化染色，免疫标记操作及程序见试剂说明书。取已知有该蛋白表达的切片为阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。 　　1.3 结果判定 　　以细胞质内出现棕黄色着色为Survivin 和VEGF 阳性标记。高倍镜下选取 10 个/ HPE， 每个视野计数 100 个细胞， 以每例阳性细胞数26%～50%为+， 51%～75%为+ +，≥76%为+ + +。以细胞质或细胞核呈棕黄色着色为HPV16- E7阳性标记，连续观察 10个高倍视野，以阳性细胞数 10%为阳性[4]。 　　1.4 统计学方法 　　采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，Survivin、HPV16- E7蛋白和VEGF的表达与临床病理参数间的关系采用χ2检验，Spearman相关分析Survivin与HPV16- E7蛋白及Survivin与VEGF的相关性。以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 Survivin、HPV16- E7蛋白和VEGF在宫颈组织中的表达 　　Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF在对照组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、宫颈鳞癌中的表达均随宫颈病变加重而呈递增趋势。Survivin在CINⅡ组与CINⅠ组、CINⅢ组与CINⅡ组相比差异有统计学