[胆碱][氨基酸]离子液体调控核酸结构稳定性的分子作用机制.docVIP

[胆碱][氨基酸]离子液体调控核酸结构稳定性的分子作用机制 　　摘 要：本文首先合成并表征了[胆碱][甘氨酸]离子液体，以小牛胸腺DNA（ct-DNA）为模型核酸，采用圆二色谱法研究了常温下核酸分子在[胆碱][甘氨酸]离子液体中的结构稳定性，进而采用荧光滴定光谱法研究了[胆碱][甘氨酸]离子液体调控DNA结构稳定性的分子作用机制。红外光谱、核磁共振等表征结果表明合成的[胆碱][甘氨酸]结构稳定、纯度高。圆二色光谱结果表明常温条件下ct-DNA在[胆碱][甘氨酸]离子液体保存100天后，其结构保持稳定。荧光滴定光谱结果表明[胆碱][甘氨酸]离子液体与ct-DNA之间的结合模式是沟槽结合，且是结合于小沟区。同时，研究结果也表明[胆碱][甘氨酸]离子液体是一种潜在的能够在常温下长期保存核酸的溶剂。 　　关键词：核酸；离子液体；DNA保存；分子作用机制 　　核酸因其结构多样性已经成为纳米技术的重要工具，作为一种先进材料引起了人们极大的兴趣，并得到了广泛应用[1-2]。核酸在水溶液中不能保持结构的长期稳定是制约其广泛应用的关键因素。因此找到一种能够溶解核酸且使之在室温下能够长期储存而不发生结构变化的溶剂具有重要意义[3]。 　　研究表明离子液体是核酸的良好溶剂，而且可以提高核酸的结构稳定性[4，5]。随着对离子液体研究的深入，发现大多数离子液体都存在潜在的生物不相容问题[6，7]。胆碱离子广泛存在于细胞中，因此胆碱离子液体被认为是一种生物相容性良好的离子液体[5]。氨基酸是细胞内的重要组成物质，氨基酸因其两性，既可以作为离子液体的阳离子又可以作为阴离子。 　　本文首先根据文献[8]报道的方法，合成并表征了生物兼容性良好的[胆碱][甘氨酸]（[Ch][Gly]）离子液体，然后以小牛胸腺DNA（ct-DNA）作为模型核酸分子，采用圆二色光谱、荧光光谱等实验手段，研究模型核酸分子在[胆碱][甘氨酸]离子液体中的结构稳定性，探讨离子液体调控核酸结构稳定性分子作用机制。 　　1 实验部分 　　1.1 [胆碱][甘氨酸]的合成与表征 　　[Ch][Gly]离子液体可通过简单的中和反应制得。根据文献[8]报道的方法，合成[Ch][Gly]离子液体，然后采用傅里叶变换红外光谱（FT-IR）、核磁共振（1H NMR）和元素分析等方法对合成的[胆碱][甘氨酸]离子液体进行表征，确定离子液体的结构和组成，并测定其水含量。 　　1.2 圆二色光谱分析 　　JascoJ-815型圆二色光谱仪用于测量DNA的摩尔椭圆度θ。样品池厚度为1cm，光谱带宽为1nm，扫描速度为50nm/min，扫描波长范围为240～320nm，取3次重复扫描的平均值作为结果进行分析。 　　1.3 荧光探针置换实验 　　等量等浓度的ct-DNA水溶液（1μg/mL）中，分别加入不同量的离子液体和一定量的荧光探针DAPI和Hoe33258，室温25℃下孵育30分钟后，测定其荧光光谱强度。DAPI体系的激发波长为358nm，发射波长为468nm，而Hoe33258体系的激发波长为348nm，发射波长为480nm。取3次重复测量的平均值作为结果进行分析，根据公式（1）计算各样品的荧光强度降低百分比（FI%）。 　　式中FIT、FIC、FI0和FID分别表示荧光探针-DNA-离子液体体系、荧光探针-离子液体体系、荧光探针-DNA体系和荧光探针分子水溶液的荧光强度，所有体系中荧光探针的浓度相同，DNA的浓度也相同，而离子液体的浓度不同。每种荧光探针分子系列体系中，[Ch][Gly]离子液体的浓度分别为5×10-5、5×10-4、5×10-3、5×10-2、8×10-2、0.1、0.2、0.3和0.4mol/L。 　　2 结果与讨论 　　2.1 [胆碱][甘氨酸]离子液体的表征 　　[Ch][Gly]离子液体的红外光谱吸收峰为：3418cm-1、2970cm-1、1482cm-1、1581cm-1、1401cm-1、1086cm-1、1056cm-1、956cm-1、655cm-1。[Ch][Gly]离子液体1H谱数据为：3.22（s，9H，CH3，CH3，CH3），3.26（s，2H，CH2-N），3.52-3.55（m，2H，CH2），4.06-4.10（m，2H，CH2）。[Ch][Gly]离子液体的C、H、N元素分析实验值分别为47.135%、15.708%和10.101%。结果表明元素分析实验值与理论值基本吻合，同时也表明合成的[Ch][Gly]离子液体的纯度较高。[Ch][Gly]离子液体于70℃真空干燥48h后，采用Karl-Fischer滴定法测定其水含量。测得含水量质量分数为0.04%，表明合成的[Ch][Gly]离子液体的含水量很低。 　　2.2