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不同温度对HE染色效果的影响 　　摘要： 取草鱼的肾组织、肝?M织、肠组织，选择25、35、45 ℃这3种不同温度进行HE染色，以观察不同温度条件下的染色效果。结果表明，在35 ℃温度时所染的装片脱蜡较为彻底，染色效果很明显，细胞核与细胞质以及细胞之间的间隙可以清晰看到；而在25、45 ℃温度条件下染色效果则不明显。 　　关键词： 草鱼；HE染色；组织切片；最适温度；染色效果 　　中图分类号： S917 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2017）22-0168-02 　　HE染色即苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining），是石蜡切片技术里常用的染色法之一 。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法[1]。苏木精可以将组织的嗜碱性结构（如核糖体、细胞核及细胞质中的核糖核酸等）染成蓝紫色，伊红可以将组织的嗜酸性结构（如细胞内及细胞间的蛋白质，包括路易体、酒精小体以及细胞质的大部分）染成粉红色，使整个细胞组织的形态清晰可见[2]。组织切片方法是教学、科研、病理检验工作中非常常用的一种试验方法，HE染色则是在制作切片的过程中最常用的染色方法[3]。 　　在实际试验操作过程中并不是每一张切片的质量都会出现预期的效果，而各种因素都会对切片的质量产生影响[4]。因此，制备一张质量好的切片，考虑的因素必须是多方面的，而温度的影响则是不可忽视的因素之一。 　　本试验选择外观正常、生长状况良好、体表无明显病变的草鱼，处死后取其肾、肝、肠分别进行组织学切片，选择25、35、45 ℃等不同的温度处理，观察在不同温度条件下的染色效果，以期找出HE染色的最适温度，为组织切片的染色技术提供一定帮助。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　1.1.1 材料 　　草鱼的肾、肝、肠组织切片。 　　1.1.2 试剂配制 　　常用于组织学切片制作的试剂有Bouin氏液（苦味酸75 mL、40%甲醛25 mL、冰醋酸5 mL）、粘合剂（鸡蛋清）、清洗液（重铬酸钾80 g、水1 000 mL、粗制浓硫酸120 mL）、乙醇（分别配制了70%、80%、90%、95%、100% 5种浓度）、1/2二甲苯（乙醇和二甲苯按1 ∶ 1比例配制）、氨水（1%）、酸水（1%）、0.2%苏木精染色液（苏木精6 g、无水乙醇100 mL、硫酸铝钾150 g、蒸馏水2 000 mL、碘酸钠1.2 g、冰醋酸120 mL、甘油900 mL）、0.5%～1.0%伊红染色液（95%乙醇配制）等。 　　1.1.3 试验仪器 　　本试验所用的仪器主要有精密电子天平 （AUY）、电热鼓风干燥箱（101-5型）、包埋机（徕卡YB-6LF）、轮转式切片机（徕卡RM2016）、摊片机（徕卡HI1210）等。 　　1.2 试验方法 　　试验的主要步骤如下：取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、展片、染色、封片、镜检观察，详细步骤参考唐从国等的方法[5]。 　　2 结果与分析 　　2.1 不同温度条件下草鱼肾组织的HE染色效果 　　用显微镜观察3种温度条件下进行的HE染色，可以明显发现，在25 ℃时，由于温度较低，组织之间的蜡块没有完全脱掉，细胞核模模糊糊，不呈蓝色，颜色比较暗沉，不清晰，染色效果不明显（图1-a）；在35 ℃时，可以清晰地看到细胞间的界限，细胞核呈蓝色，其他部分呈红色或者粉红色，细胞排列紧密、 规则，染色效果很明显（图1-b）；45 ℃时染色效果比35 ℃的差，可以看到细胞界限，但是部分组织或者细胞核破裂，细胞核着色不明显或发灰（图1-c）。以上结果显示，对于草鱼的肾脏组织，在35 ℃左右的温度条件下染色效果较好。 　　2.2 不同温度条件下草鱼肝组织的HE染色效果 　　用显微镜观察不同温度条件下肝组织的切片，可以发现，在25 ℃时，肝组织中有很多蜡块没有脱掉，细胞核模糊，但形态依稀可见，细胞界限不清晰，细胞核能被染成蓝色，但是染色效果不明显（图2-a）；在35 ℃时，可以很清晰地看到肝细胞呈卵圆形，细胞核大而圆，且被染成蓝色，周围的组织也被染成粉红色或者红色，细胞界限清晰，染色效果较好（图2-b）；在45 ℃时，可以发现细胞之间的界限比较模糊，隐约可以看到细胞核被染成淡蓝色，少数组织染色不均，染色效果较35 ℃时稍差（图2-c）。以上结果显示，对于草鱼的肝脏组织，在35 ℃左右的温度条件下染色效果较好。 　　2.3 不同温度条件下草鱼肠组织的HE染色效果 　　用显微镜观察不同温度条件下的草鱼肠组织切片，可以发现，在25 ℃时，跟肾组织和肝组织切片一样，组织块之间的蜡没脱完全， 可以隐约看到肠绒毛，细胞界限不清晰，细胞核 　　染色较明显（图3-a）；