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三维肿瘤球聚体的构建及其研究进展 　　【摘要】 三维体外细胞培养既能模拟体内细胞之间以及细胞外基质间信号转导的微环境，又可再现细胞培养的直观性及条件可控性。近年来三维体外细胞培养技术在生物医学研究中有着越来越广泛的应用，是药物毒性、肿瘤多耐药性、抗肿瘤药物高通量筛选及药物代谢等研究的有力工具。本文就三维肿瘤球聚体的构建及其最新的研究进展作简要综述。 　　【关键词】 三维细胞培养； 肿瘤球聚体； 生物材料； 药物筛选 　　【Abstract】 Three-dimensional cell culture in vitro can not only simulate the microenvironment of intercellular signal transduction between cells and extracellular matrix， but also can reproduce the conditions in cell culture. In recent years， three-dimensional cell culture technology has increasingly widely used in biomedical research， which becomes a powerful tool for drug toxicity assay， tumor multi-drug resistance， high-throughput screening of anticancer drugs and drug metabolism. In this paper， we give a brief review of their latest research progress on construction of three-dimensional tumor spheroid in vitro. 　　【Key words】 Three-dimensional cell culture； Tumor spheroid； Biomaterial； Drug screening 　　First-author’s address：He’nan Shuguang HZK Biological Technology Stock Co.，Ltd，Luohe 462332，China 　　doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.09.050 　　细胞的生长环境和培养条件对细胞特定基因的表达及细胞的生物学行为能产生极大的影响，如细胞极性、结构、迁移、侵袭等[1-2]。目前，肿瘤的体外研究依然主要依靠肿瘤细胞的单层平面培养，然而传统单层培养的细胞无论是在形态、结构和功能等方面都与在体内自然生长的细胞有很大的差别，其无法真正反映体内呈三维状态生长的肿瘤。因此，在体外建立适合细胞和组织生长的生理微环境的三维细胞培养体系可方便地用于肿瘤侵袭和转移研究以及药物筛选的体外研究[3-5]。这种特定的类似组织样的三维微空间结构可以为体外生长的细胞提供类似体内生长环境的生物支撑或基质，建立细胞间及细胞与胞外基质间的相互联系。 　　由于在模拟细胞与细胞间、细胞与细胞外微环境相互作用方面的独特优势，近年来，三维细胞培养在肿瘤体外研究中获得广泛应用，成为肿瘤耐药、药物载体、药物毒理、肿瘤治疗、血管形成、信号转导、干细胞等方面研究不可或缺的有力工具[6-13]。特别是在抗肿瘤药物筛选方面，体外构建三维肿瘤球聚体与动物移植实体瘤模型相比，具有可重复性强、缩短研究时间、降低成本方面的优点，更不致引起动物伦理方面的争议。因而，在肿瘤体外研究中，体外构建三维肿瘤球聚体越来越受到研究者的青睐。 　　1 体外构建三维肿瘤球聚体主要方法 　　1.1 多孔支架培养法 体外二维培养肿瘤细胞很难聚集形成球状体，最初一些研究小组开发了支架培养肿瘤细胞成球，这种培养方法是利用体外肿瘤球状体可由生长在预制支架上的肿瘤细胞产生，细胞吸附和移居在缠绕的纤维上，随着细胞的分裂，它们填充支架内的间隙，这样会形成三维球状体[14-15]。不过支架的组成成分会对培养细胞的性能有很大的影响，目前，最常用的支架是胶原，此外，细胞外基质蛋白（ECM）也经常一起使用，同时，辅以必要的生长因子，这能增加细胞生长和含有其他调节因子的可能性。支架也可以用原代细胞和小片组织灌输。这种方法是较早、最常用、也是研究得最多的一类。 　　1.2 旋转培养法 在旋转培养出现以前，三维细胞培养都是静态培养，静态培养不利于营养物质和代谢废物的运输，妨碍肿瘤实体瘤的生长，为了解决这方面的不足，后来许多研究小组开发了动态培养方法如旋转烧瓶、滚筒