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一氧化氮对活性氧胁迫下玉米胚根生长的影响 　　摘要:研究一氧化氮对0.5mmol/L甲基紫精胁迫下玉米胚根生长及活性氧代谢的影响。 　　关键词:一氧化氮 活性氧 玉米胚根 生长影响 　　 　　1一氧化氮对活性氧胁迫下玉米胚根生长原理 　　植物的氧化损伤机理及对氧化胁迫的抗性是近年来环境生理、分子生物学和作物抗性育种研究中倍受关注的问题。在正常生理条件下,植物代谢过程产生活性氧是电子传递体系不可缺少的结果,而不良环境条件会使体内活性氧的产生受到刺激,从而导致氧化胁迫。研究表明,甲基紫精处理植物器官或组织可以产生活性氧,导致植物的氧化胁迫。一氧化氮是近年来人们比较关注的一种生物活性分子,它也是植物体内一种重要的氧化还原信号分子和毒性分子。在植物体内主要通过一氧化氮合酶和硝酸还原酶催化合成。它在植物体内具有双重性,具体表现视其浓度、作用部位及细胞的生理条件不同而异。一方面,低浓度的一氧化氮对植物具有保护作用,可以通过与效应分子反应而直接起作用或者通过改变细胞氧化还原电位差而间接起作用,参与植物生长、发育和对环境适应的信号转导过程;另一方面,高浓度的一氧化氮会诱发超氧阴离子自由基和过氧化氢大量产生,对组织和细胞具有破坏性。硝普钠是一种外源NO供体,通常,0.15mmol/L的SNP大约可以产生小于0.2 mol/L的NO。一氧化氮在植物中的相关研究起步较晚,已有的研究结果表明:一氧化氮在植物呼吸作用、气孔运动、种子萌发、根与叶的生长发育、果实等器官的成熟衰老、植物抗逆反应等生理过程中有重要作用。 　　2测定方法 　　2.1蛋白质含量的测定 　　2.1.1试剂 　　⑴考马斯亮蓝G-250蛋白试剂配制 　　称取100g考马斯亮蓝G-250,溶于50ml95%乙醇中,加入85%(w/v),正磷酸100ml,最后用蒸馏水定容至1000ml(注意:加入乙醇后,使其充分溶解后再加入磷酸,完全溶解后再用蒸馏水定容)。此液在常温下可放置一个月。 　　⑵蛋白质标准溶液的配制 　　称取25mg牛血清蛋白(BSA),用蒸馏水定容至25ml,即成1000μg/ml的母液。 　　从各管中分别吸取0.1ml(视其最大光吸收值而定,最大光吸收值不宜超过0.9),于另一组试管中,分别加入考马斯亮蓝G-250蛋白试剂3.0ml,室温下静置2min后,在595nm处进行比色,记录A595。 　　以A595为自变量,以蛋白质浓度C(g/ml)为因变量,求其直线回归方程,蛋白质浓度C(mg/mL)=a+b*A595, 　　蛋白质含量计算公式: 　　蛋白质含量(mgprotein/gFW)=[C(mg/ml)*Vt/V]/样品鲜种(g) 　　C(mg/ml)=-0.098571+1.38785*A595 　　回归系数R=0 　　2.1.2样品蛋白质含量的测定 　　先在试管中加入3ml考马斯亮蓝G-250蛋白试剂,再加入样品酶提取液0.03ml～0.1ml(视其最大光吸收值而定),摇匀,在595nm处测定其光吸收值,记录A595。三次重复。 　　2.2 H2O2含量的测定 　　2.2.1试剂 　　⑴5%Ti(SO4)2的25%(v/v)硫酸液 　　⑵1mol/l硫酸液:34.25ml浓硫酸,加蒸馏水稀释至500ml即可。 　　⑶(冰)丙酮 　　⑷氨水 　　向各试管分别加入0.5ml 5%Ti(SO4)2的25%(V/V)的硫酸液和1ml浓氨水。混匀后,稍加静置,于12000rpm离心8min,加入1.5ml(冰)丙酮洗涤沉淀1次,加入4ml 1mol/L的硫酸液溶解沉淀,待沉淀充分溶解后,溶液在420nm处测定光吸引值,记录A420。 　　以A420为自变量,以H2O 浓度(mol/ml)为因变量,求其直线回归方程: 　　H2O2浓度(mmol/ml)C=a+b*A420。 　　H2O2浓度计算公式:C(mmol/5ml)=0.06234+15.5059*A420 　　回归系数R=0 　　2.2.2 样品H2O2的提取和测定 　　称取0.5g玉米胚根,加入5ml冰丙酮研磨。匀浆液倒入离心管并平衡,在10000rpm下离心8min后,吸取上清夜备用。吸取1ml上清夜加入试管中加蒸馏水至5ml,摇匀,然后加入0.5ml 5%Ti(SO4)2的25%(V/V)硫酸液及1ml浓氨水;摇匀后稍加静置,倒入离心管在12000rpm下离心8min;沉淀用1.5ml(冰)丙酮洗涤1次,最后加入4ml 1mol/l硫酸液溶解沉淀,如不溶,可置于旋涡器上适当振荡以加速溶解。溶液在420nm处测定光吸收值,记录A420。四次重复。 　　2.2.3 H2O2含量计算 　　H2O2含量(mol/g