三维细胞培养技术研究与展望.docVIP

三维细胞培养技术的研究与展望 　　摘 要：单层细胞培养由于细胞是在改变的体外环境下增值生长，因此会丧失原有组织的性状，不利于科学研究。而体外三维培养技术是将细胞、细胞基质放到体外去培养，并且营造与体内相似的内环境，使细胞能够表达合理的基因及性状，有观察直观和条件可控的优点。本文对三维细胞培养技术在诸多生命科学领域的应用，以及对此技术的未来发展做一综述。 　　关键词：细胞培养；肿瘤治疗；肿瘤血管形成；器官再造 　　中图分类号：Q943.1 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2017）17-0203-02 　　单层细胞培养于1885年以来首次从鸡胚中分离出细胞建立体外培养[1]，距今有百年历史，在此期间单层细胞培养技术为医学领域带了新的希望，但随着科技的进步，人类对于健康不断提出更高的要求，虽然人类越来越多的疾病可以被治愈，同时也存在许多有待解决难题，比如器官移植存在的排斥反应、移植器官来源少等问题，在未来能很好解决这一问题的技术即三维细胞培养技术。这一技术的出现，给医学界带来了更大的进步和希望。 　　1 三维细胞培养技术 　　三维细胞培养技术（three-dimensional cell culture， TDCC）是指将具有三维结构不同材料的载体与各种不同种类的细胞在体外共同培养，利用各种方法及材料，使细胞在载体的三维立体空间结构中迁移、生长，构成三维的细胞-载体复合物。更接近于体内生长模式，形成类似体内组织的结构，发挥其功能。[2，3]三维细胞培养技术在抗癌药物的筛选、组织形成、血管发育等发育生物学的分支领域得到了广泛的应用。 　　2 三维细胞培养技术的分类 　　2.1 基于scaffold的培养体系和无scaffold的培养体系 　　Scaffold则又有天然成分和人工合成成分之分。基于scaffold的培养体系是没有供细胞粘附、生长和扩散的支撑结构，使培养基中的细胞聚集成为类似于组织的微组织球体（micro tissue spheroids）。无scaffold的培养体系可通过悬滴（hanging drops）让细胞在重力的作用下通过自组装形成微球体。这种方法的优点是可以通过控制悬滴而精准的控制微组织球，使其具有高一致性，为后续研究提供好的微组织材料。而且通过悬滴法可以实现对不同细胞类型的共培养，保证共培养细胞间的信息交流。无scaffold的培养体系天然ECM作为支持材料的3D培养，这种方法以天然ECM作为支持材料，根据培养细胞类型，优化3D培养基质配方，以满足不同组织细胞的培养需求。但天然基质材料存在一定病原风险，且材料可能存在批次差别性等缺点。而人造基质作为支持材料的3D培养方法，合成的人造基质材料类型相当多，可使体外细胞培养更接近体内的生理特征，是基础研究、药物筛选和再生医学等领域的理想选择。 　　2.2 静止性三维细胞培养和动力性三维细胞培养 　　静止性三维细胞培养是把细胞直接种植在三维载体上，体外不施加任何物理方法下进行的培养。采用静止细胞培养方法不利于细胞向载体内部生长，培养液很难扩散渗透到载体的中心，氧气、营养物质扩散和代谢物排出受限，从而影响载体内部细胞的代谢活性。因此，需要改善培养条件或细胞种植方法来解决细胞活性降低、数量不足和分布不均匀的问题。动力性三维细胞培养就是根据细胞在自然条件下生长受力情况，在培养过程中适当应用物理方法。动力性三维细胞培养不仅为细胞生长提供了适宜的生物性微环境和力学刺激，而且能更好地促进细胞功能的发挥。由上可见，当前的细胞培养系统的完善，越来越趋向于模拟体内正常的环境。 　　3 三维细胞培养技术在医学领域的应用 　　3.1 三维细胞培养技术与肿瘤医学 　　3.1.1 抗肿瘤治疗 　　肿瘤是人类的一大顽疾，伴随医学研究技术的不断进步，抗肿瘤药物层出不穷，不断更新，化疗仍是治疗肿瘤的重要手段，在抗癌药物的研发过程中药物筛选极其重要。而三维细胞可以高度模仿肿瘤细胞的生长状态，可以提供肿瘤细胞与体内相似的酸碱度、营养物质、生长因子等内环境，还可以充分展示细胞-细胞、细胞-基质间的相互作用，有利于抗癌药物药效的测定。Ong等[4]在观察三维多细胞肿块球形体药透时，发现细胞外基质蛋白可能是药物渗透的屏障，该现象在体内也常被发现，是肿瘤耐药的较常见原因之一。Hkanson等[5]研究三维模型中环境参数对抗肿瘤药物的影响时，发现细胞间连接、维度（dimensionality）、基质组成的微环境均影响乳腺癌细胞MCF-7对抗肿瘤药紫杉醇的反应，尤其在纤维蛋白为基质培养生长的细胞，药物敏感明显降低，与体内研究发现，纤维蛋白表达上调会增强乳腺肿瘤细胞侵袭和转移相一致。三维细胞培养技术在抗肿瘤治疗领域，较好的弥补了单纯二维培养的不足，成为抗肿瘤治疗的关键。