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乳酸在根结线虫病害防治中的作用研究 　　摘要 乳酸是由乳酸菌厌氧发酵的产物，属小分子有机酸。通过使用乳酸对根结线虫进行了室内外防治试验，结果表明：低浓度乳酸能降低根结线虫卵的孵化率，延缓根结线虫幼虫的生长发育；室内栽培试验表明，乳酸能降低根结线虫病害发病程度；经圆饼法测试表明，乳酸能明显抑制土传病原真菌的生长。 　　关键词 乳酸；根结线虫；病原菌；防效 　　中图分类号 S481+.9 文献标识码A文章编号1007-5739（2008）13-0131-02 　　 　　植物寄生线虫每年引起的作物损失超过800亿美元（Handoo，1998），根结线虫引起的损失占所有线虫损失的一半，同时，一些植物寄生线虫可以传播植物病毒或对植物造成伤口，增加其他病原物对植物的侵染，尤其在作物生长的后期，由真菌造成的损失尤其严重。Atkinson（1892）注意到根结线虫加重由镰刀菌引起的棉花萎蔫病；Coursen（1957）在根结线虫存在下，用镰刀菌接种抗镰刀菌萎蔫病的番茄品种，结果诱发了萎蔫病；Van Gundy等（1977）研究发现，受南方根结线虫侵染的番茄，根吸引立枯丝核菌的菌丝，促进最初菌核的形成，加重根腐烂程度；Minton（1963）研究指出，在线虫侵染的根内，木质部丧失对真菌侵染的防御，真菌可通过正在腐烂的组织进入木质部[1]。目前防治根结线虫的主要方法是抗性品种培育、化学防治、修耕轮作等。无毒副作用的小分子生物有机酸在线虫病害防治中也有部分研究，这些有机酸包括甲酸、乙酸、丙酸、丁酸等，其中丁酸的防治效果最好（Johnston，1959）。到目前为止，未查询到有关乳酸防治根结线虫的报道。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1材料 　　1.1.1乳酸。北京化工厂生产，分析纯，含量85%～90%。 　　1.1.2根结线虫卵。栽培番茄接种根结线虫培养60d后，采卵囊，制作散卵粒（1 000粒/mL左右）。 　　1.1.3根结线虫2龄幼虫。栽培番茄接种根结线虫培养60d后，采卵囊，25℃孵化5～7d。 　　1.1.4病原菌。立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、串珠镰孢菌（Fusarium moniliforme）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporium），自分离。 　　1.2方法 　　1.2.1不同浓度乳酸抑制根结线虫卵孵化作用。用无菌水配制0.02%、0.04%、0.06%、0.08%、0.10%、0.12%、0.14%、0.16%、0.18%、0.20%乳酸溶液，在Φ6cm培养皿中分别加入5mL上述浓度的乳酸溶液，以无菌水为对照，再加入0.1mL卵悬浮液，3次重复，25℃恒温培养。7d后镜检孵化线虫数，计算抑制孵化率。 　　1.2.2乳酸对根结线虫2龄幼虫的杀灭作用。用无菌水配制浓度为0.00%、0.02%、0.04%、0.06%、0.08%、0.10%的乳酸溶液，在Φ6cm培养皿中分别加入5mL上述浓度的乳酸溶液，再加入0.1 mL根结线虫2龄幼虫悬液（大约1 000条/mL），3次重复，25℃恒温培养，24h后，检查死亡幼虫数。 　　1.2.3圆饼法测试乳酸对病原菌生长的抑制作用。病原菌提前培养，涂平板，用牛津杯打孔，制备菌饼。在不同浓度（0.01%和0.10%）乳酸含量的培养基上放一菌饼，以不含乳酸的培养基上放一菌饼为对照，3次重复，25℃恒温培养，测量菌落直径。 　　1.2.4乳酸防治室内盆栽番茄根结线虫病害。使用无菌土育苗，苗长到3片真叶时移栽，移栽时每营养钵加200g大棚土，5d后加根结线虫悬浮液，每钵加5 000条左右的线虫幼虫，同时加入0.05%乳酸20mL，6次重复，60d后检查结果。检测项目包括乳酸对番茄苗生长的影响、病害发生程度、土壤中真菌种类、数量变化情况等。 　　（1）乳酸对根结线虫病防治作用。根据根瘤数量定级，计算防效，防效计算公式如下[2]： 　　 　　（2）乳酸对番茄生长的影响。栽培结束后，去掉根际土壤，用流动水冲洗根部，测量株高，105℃烘干2h，测总重量。 　　（3）乳酸对土壤中真菌种类、数量的影响。栽培结束后，将各处理的土样分别混合均匀，阴干，过60目筛。取1g土样，加入到装有19mL无菌水的三角瓶中，振荡30min，做10倍梯度稀释，取10倍、100倍、1 000倍稀释液0.1mL涂平板，25℃恒温培养7d，检查平板中菌落数及菌落种类。 　　1.2.5乳酸复合土壤宿生菌对根结线虫卵孵化抑制作用。取发病植株根际土壤，阴干，用稀释平板法分离真菌，共分离到33种真菌。经纯化后，再分别涂平板，25℃培养，制备菌饼。采用水琼脂法，抑制卵孵化。每种真菌分别使用水琼脂和加入0.02%乳酸的水琼脂平板。散卵粒浓度为1 000粒/mL。待