蛋白质芯片技术和P504S2fCK34βE122fp63标记在前列腺癌早期诊断中的意义.pdfVIP

存于-80C低温冰箱中。 2．2方法 主要仪器 蛋白质芯片阅读机(PBSII—C)(CiphergenInc．美国)：实际上是一台激光解吸电离 飞行时间质谱仪。可以检测IkD的小分子物质以及多肽，也可以检测500kD以下的大分子 物质。它与蛋白质芯片结合在一起构成蛋白质芯片检测系统。 WCX一2芯片(CiphergenInc．美国)：为弱阳离子交换芯片，其表面结合有弱型阴离子 羧基，可以和被分析物表面的正电荷集团相互作用(如赖氨酸、精氨酸和组氨酸)而捕获 蛋白，可用于检测高等电点的蛋白质和生物标记分子。 Inc．美国) Bioprocessor：(Ciphergen Dell服务器：(DellInc．美国) Ninishaker 振荡平台：MSI 主要试剂 量吸收分子SPA等主要试剂均购自德国Sigma公司。 实验步骤 (1)血清样品处理 ● 取血清5眦，用10p1U9缓冲液稀释，用手指轻敲样品管底部，将样品充分混匀。 ． 冰浴置振荡器400—600转／分，振荡30分钟。 ● 将15p1上述变性样品加入1809l相应的结合缓冲液，使得血清的总稀释倍数达 到39倍，混匀。 (2)芯片处理 ● 芯平预处理：将芯片用lOmlHCL冲洗(试管中)，再用HPLC超纯水冲洗，晾干。 ● WCX-2 芯片平衡：每孔加入200pI 体。重复操作二次。 (3)芯片与蛋白质结合反应 ● 振荡1小时，弃掉液体。 (4)芯片冲洗 WCX-2 ●每孔加入200肛1 作二次。 ●每孔加入200M1HPLC水，立刻甩出。拆开芯片处理器，取出芯片待干。 (5)蛋白质获能 ● 每个加样孔加SPA0．59l，自然挥发后重复一次，晾干。 (6)数据采集和结果分析 ‘蛋白质芯片采用蛋白质芯片阅读机PBSII型读取数据。仪器每天用标准多肽和低于 200kD的蛋白质标准分子较正，系统的质量偏差为O．1％。 蛋白质芯片阅读机条件设置：激光强度195，检测灵敏度8；检测最高相对分子质量 200kD，优化分子质量范围2-20kD。 波峰结果分析使用CiphergenBiosystems软件3．1．1版本。 信号噪声比(S／N)大于5为有效波峰。 计算机从所获得的原始数据快速精确地绘制出蛋白质质谱图。其中纵坐标为蛋白质相 对含量，横坐标为蛋白质质核比。 统计学分析 采用Ciphergenproteinchip Wizard软件对数据进行统计学处理，不同组之间蛋白峰比较采用配对资料的t检验，确定 两组之间P值小于0．05时具有统计学意义。 6 山西医科大学确士学位论文 结果 1．单标中P504s在前列腺癌及其类似病变中的表达情况 P504S在肿瘤细胞中呈一种强的棕黄色弥漫性胞质染色。30例前列腺癌显示弥漫胞浆 染色强度较前列腺癌有所减弱；BPH、基底细胞增生及前列腺非典型腺瘤性增生病例腺泡 上皮细胞均未见P504S阳性表达。(见表1) 表1 不同前列腺病变组织的P504S表达情况 注：P504S阳性表达率在前列腺癌与HGPIN之间比较无显著性差异(PO．05Fisher确切概率法)． 与AAII、BcH、BPtl之间比较差异有显著性(P(O．01)． 2．复合型抗体P504S／CK34pEl2／p63在前列腺癌及其类似病变中的表达情况 P504S阳性染色主要位于前列腺癌腺上皮细胞的细胞质内，呈蓝黑色粗大的颗粒状物。 蓝黑色颗粒分布主要表现为两种形式：腔缘型和胞质型。腔缘型是指蓝黑色颗粒在腺上皮 细胞靠腺腔侧较为密集