sp阳性神经纤维在退变腰椎间盘的分布及意义.pdfVIP

1切片入二甲苯脱蜡5分钟x2次 2纯酒精5分钟x2次 3 95％酒精5分钟x2次 4 80％酒精5分钟x1次 S自来水洗S分钟 6 1％苏木素染色3分钟 7自来水洗去浮色，l％盐酸酒精分色10秒，自来水返蓝20分钟 8切片入l％伊红染色3分钟，自来水洗去浮色。 9 90％酒精脱色30秒 1095％酒精S分钟x2次 11纯酒精S分钟x2次 12二甲苯透明5分钟x2次，中性树胶封片。 3．2SP法免疫组织化学染色步骤 1)切片在二甲苯中脱蜡，经各级乙醇脱水，蒸馏水洗。 2)3％H202室温20分钟以灭活内源性酶，蒸馏水洗2分钟×3次。 3)热修复抗原：将切片浸入0．01M柠檬酸盐缓冲液(PH6．0)，微波炉加热至沸 7．2—7．6)洗2分钟×3 腾后断电，间隔5—10分钟后再沸腾，冷却后PBS(PH 次。 4)滴加5％血清封闭液，室温20分钟．甩去多余液体，不洗。 5)滴加IgG兔多克隆抗体，冰箱过夜，PBS洗2分钟×3次· 7)滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，室温下孵育30分钟，PBS洗3分钟×3 次。 l滴C，混匀，呈色5min，自来水洗3次。 9)苏木素轻度复染、脱水、透明、封片a 10)显微镜观察。 4统计学方法 3 sPssoo．0版本)统计学软件对数据进行处理，比较其差异是否有统计学意 义。 试验结果 试验共收取病变椎间盘21个，正常椎间盘标本12个，共计33个标本进 行结果处理。 l HE染色标本 (1)正常椎间盘标本：镜下观察见纤维环中胶原纤维红染，呈同心圆排列， 排列规则，可见软骨细胞呈纺锤形，位于软骨陷窝内，基质少见，髓核染色可见 成片排列的胶原纤维网，较稀疏，排列不规则，其间散在分布的均染一致的淡红 色胶冻样物质，其中包绕着软骨细胞和软骨细胞岛。 (2)病变腰椎间盘：镜下观察见纤维环红染排列不规则，胶原纤维紊乱，增 粗，断裂，可见类软骨细胞增生、聚集成簇，外形由纺锤形变成了圆形，基质合 成增多，纤维环板层状结构破坏，髓核纤维化，髓核细胞呈梭形，似成纤维细胞， 基质密度增大，肉芽组织增生，炎性细胞浸润。 2SP染色标本 (1)对照组和病变组结果比较 sp阳性神经纤维出在正常对照椎间盘，仅在纤维环的外层偶见散在的SP免 疫组化染色阳性神经纤维分布，只见于3个椎间盘；在椎间盘突出患者的手术标本 中，sP阳性神经纤维分布数量和比例较正常对照椎间盘明显增多(详见表1)。 表1两组中出现sp阳性神经纤维椎间盘个数 对两组标本内sp神经纤维阳性率进行比较，采用spsslO．0统计学分析，好=11．933 p=O．0010．05，可以认为两组中sp阳性神经纤维的阳性率有统计学差异。 4 阿回 I!圜丝I 。7二几 ■ =qRR#_月Ⅻi■■■g％■■％％E■M■E■■■^*“…～ 一 图对照组和病变组结果 (2)病变组sp阳性神经纤维数目比较 对于sp阳性的病变椎间盘标本进行了定量分析，随机选取5个高倍镜视野 进行平均计数。根据2001年Pfi册ann“1提出的方法，将退变程度进行相应分级。 根据椎间盘在MRI的T2像上表现，分为五级，I级：椎间盘结构均匀，中间为 亮白色高密度信号影，高度正常。II级：椎问盘结构不均匀，中间为白色高密度 信号，椎问盘高度正常，髓核和纤维环分界清楚，伴或不伴水平的灰色带。Ⅲ级： 椎间盘结构不均匀，中间为灰密