乙型肝炎病毒DNA定量检测临床应用.docVIP

乙型肝炎病毒DNA定量检测的临床应用 　　【摘要】 目的：探讨乙型肝炎患者HBV-DNA含量与其乙型肝炎血清学标志物的关系。方法：采用微板核酸杂交技术对200例乙型肝炎血清学标志物阳性的患者和20例正常健康人群，进行HBV-DNA PCR定量检测。结果：根据血清学标志物分为五组，HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性患者HBV-DNA含量高于其他患者，比较差异有统计学意义（P0.05），HBsAg、抗-HBe、抗-HBc均阳性患者与HBsAg、抗-HBc均阳性患者DNA拷贝数比较差异无统计学意义。结论：乙肝血清学标志物作为乙肝病毒有无感染的指标不能完全反映患者体内HBV的复制情况，HBV-DNA定量检测对监测乙肝病毒感染的病情发展及抗HBV复制药物的治疗具有重要意义。 　　【关键词】 乙型肝炎病毒； 微板核酸杂交； 血清学标志物 　　【Abstract】 Objective：To investigate the relation between the amount of HBV-DNA in serum of patients with HBV infection and the marker of hepatitis B virus.Method：Serum HBV-DNA was quantitatively detected by tiny plank nucleic acid hybridize technique of PCR to 200 policlinic patients infected with HBV and 20 healthy men.Result：The men were divided into 5 groups with the marker of HBV， there were significance differences from student test between HBsAg， HBeAg， HBcAb masculine and others.Conclusion：It is as index that the marker of HBV monitor hepatitis B virus infection， which couldn’t reflect completely replication of HBV.Quantitative detection of HBV-DNA had important significance to moniter the state of HBV infection and drug treatment. 　　【Key words】 Hepatitis B virus； Tiny plank nucleic acid hybridize； Marker of serum hepatitis B virus 　　我国是世界上乙型肝炎病毒感染的高发地区，全国约有50%～70%的人感染过乙型肝炎病毒，约10%的人为携带者。目前我国对乙型肝炎病毒感染的诊断主要依赖于血清特异抗原/抗体的检测。聚合酶链反应（PCR）因其特有的高特异性、高灵敏度在临床检测中得到广泛的应用。笔者采用微板核酸杂交法检测乙肝患者血清HBV-DNA含量，以探讨乙肝患者病毒复制与乙肝病毒标志物之间的关系及意义。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 实验组为2010年1-12月来本院就诊的患者，共200例，全部病例均为HBV血清学标志物阳性患者，年龄25～75岁，其中男148例，女52例。对照组选择20例体格检查后HBV血清学标志物全阴性、肝功能正常者，其中男10例，女10例。血清采用经高压灭菌的0.5 mL Eppendorf管分装于4 ℃保存，3 d内检测完毕。 　　1.2 试剂及仪器 试剂：HBV微板核酸杂交定量检测试剂盒（上海浩源生物科技有限公司提供），HBV血清学标志物检测试剂盒（上海科华公司提供）。仪器：PCR扩增仪（英国TECHNE-GENIUS PCR扩增仪），酶标仪（奥地利产SLT-SPECTRA型酶标仪）。 　　1.3 方法 　　1.3.1 反应原理 通过裂解液裂解释放DNA，去除杂蛋白，合成两段与目的序列的两端分别互补并标有生物素标记的寡核苷酸引物，在此反应中，生物素标记的引物结合上靶序列，在DNA聚合酶催化下，利用反应体系中的游离核苷酸（dDNA），从5’→3’方向延伸DNA链。产生与靶序列互补的链称为扩增产物。在微孔板中事先包被通用捕集探针，再与接头液分子（一头与板上通用探针互补，另一头与扩增产物互补的特异结合的捕获探针）结合，接头分子捕获扩增产物后，扩增产物上标记的生物素能与亲和素-辣根过氧化物酶结合，通过TMB显