从龙胆草中提取龙胆苦苷提取分离工艺研究.docVIP

从龙胆草中提取龙胆苦苷的提取分离工艺研究 　　[摘 要]建立从龙胆草中提取龙胆苦苷的工艺参数。方法 龙胆草切割后，用8倍量纯化水提取3次，过滤，浓缩提取液，提取液上大孔树酯柱，用25%乙醇溶液冲洗，浓缩洗脱液，洗脱液加硅胶拌样，干燥后上硅胶柱，用洗脱机洗脱，收集洗脱液，浓缩，分离，得龙胆苦苷样品。结果 所得龙胆苦苷样品纯度大于99%，单一杂质小于0.1%。 结论 所得提取物纯度高，所建立提取方法可行。 　　[关键词]龙胆苦苷 提取 分离 　　中图分类号：TM725 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）07-0026-01 　　龙胆草为龙胆科植物龙胆、条叶龙胆、三花龙胆和滇龙胆、的根和根茎。具有清热、泻肝、定惊之功效。《本草纲目》记载：“性味苦，涩，大寒，无毒。主治骨间寒热、惊病邪气，继绝伤，定五脏，杀虫毒。主要成分为龙胆苦苷，龙胆苦苷无法通过化学合成方法获得，只能中药提取方法获得[1-2]，动物试验研究表明龙胆苦苷能明显促进豚鼠肝组织的修复，对豚鼠同种免疫性肝损伤具有明显的保护作用。龙胆苦苷给药后，胆红素分泌量显著增高，表明具有明显利胆作用。龙胆苦苷药理作用明确[3]，具有广阔的市场价值，本文参照相关文件，建立龙胆草提取方法，从中分离龙胆苦苷。 　　1.实验材料 　　提取相关材料：黑龙江地区产2年生龙胆草，切割成5cm左右小段，乙醇及乙酸乙酯均为分析纯，大孔树酯为D101型号，来源为西安蓝晓科技有限公司。 　　设备：中药提取罐、单效浓缩器、大孔树脂柱、硅胶柱、热风循环干燥箱、球型浓缩器、真空干燥箱。 　　2.实验方法 　　2.1 药材前处理 　　药材应进行净制，去除泥土、杂物，切成5cm的小段，烘干备用。提取之前用纯化水快速冲洗无泥土即可。 　　2.2 提取工艺路线设计 　　龙胆苦苷属裂环环烯醚萜苷类成分。它溶于水、乙醇，难溶于极性小的有机溶剂。分别采用水提和乙醇回流提取，为了优选出最佳提取工艺，确定两种基本工艺路线：A水提；B乙醇提取。 　　2.3 水提取条件研究 　　正交试验筛选提取方法，对条件进行综合分析后，选定提取水量（A），提取时间（B），提取次数（C）为主要因素，按三因素，三水平设计正交实验，即L9（3）4表来安排试验比较合适。以提取液主成分的百分含量作为评价指标。称取龙胆草9份，每份100g，温度为100℃，按指定要求操作，具体试验安排及结果如下。因素水平见表1。 　　结果根据方差分析，控制显著因素，找出不显著因素，从而总结出水提最佳工艺为：提取3次，每次10倍水量纯化水，每次时间为30min。 　　2.4 乙醇提取条件研究 　　以乙醇为溶媒，选定提取醇浓度（A），提取时间（B），乙醇用量（C），提取次数（D）四因素，按四因素三水平，即L9（3）4设计正交试验，以提取液中龙胆苦苷的百分含量做为工艺评价标准。得出醇提最佳工艺为：提取3次，每次1小时，5倍量醇，醇浓度为45%。 　　从经济方面考虑，醇提工艺，醇耗大，成本高，且醇提液中混有脂溶性物质，影响产品纯度；而水提工艺，成本低，用时少，只有水溶性成分，降低主成分分离的复杂程度。确定从龙胆草中提取龙胆苦苷以水提工艺为佳。 　　2.5 提取液分离与纯化 　　大孔树脂最先用于抗生素的分离，以后在食品工业中广泛应用，现在在中药成分的提取分离中应用日渐增多，它的特点是选择性好，操作简便，可反复使用，利于环保，所以逐渐形成了中药提取的常用技术。龙胆草提取物属于单萜苷类，具有一定的水溶性，它适于大孔树脂的网状结构。实践也证明了D101型大孔树脂对提取物保留性好，容易洗脱，能有效去除原植物中的寡聚及多聚糖类物质，除去无机盐，所以选用了大孔树脂作为主要分离手段。 　　将提取液使用单效浓缩器进行浓缩，于50～60℃、-0.08Mpa～-0.098Mpa条件下浓缩至0.2kg药材/kg溶液，冷藏备用。 　　选用D101大孔树酯柱进行分离提取液中主要成分，大孔树酯处理后（酸处理、碱处理、乙醇处理），装柱（高径比大于5），将提取液以1.2L/min～1.5L/min流速通过大孔树脂柱，静止吸附4小时以上。 　　用纯化水以3.0L/min的流速淋洗树脂柱，用45%乙醇以1.0L/min的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液。通过紫外吸收在线监测收集的提取液。 　　将所得的洗脱液于50℃、-0.098Mpa条件下浓缩至浓稠膏。将浓稠膏如硅胶进行拌样，之后干燥。监测水分，水分应小于1.0%。 　　将拌样硅胶样上硅胶柱，用乙酸乙酯洗脱液洗脱，分离样品中的有效成分，样品中的主成分为龙胆苦苷，獐芽菜苦苷及獐芽菜苷，通过硅胶柱分离得到目标产物，浓缩目标产物，用乙醇反复洗涤，于真空下减压干燥，得成品，收率为4.5%。经验证，大孔树脂连续使