先天性肾盂输尿管连接部梗阻患儿尿中FOS检测分析.docVIP

先天性肾盂输尿管连接部梗阻患儿尿中FOS检测分析 　　摘要：目的 为了解FOS在先天性肾盂输尿管连接部梗阻（CUPJO）患儿中的表达。方法 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测38例先天性肾盂输尿管连接部梗阻患儿及22例健康儿童尿液中FOS，根据OD值计算相应FOS浓度，采用SPSS13.0软件进行数据收集和处理，组间比较采用两独立样本T检验，以P0.05为差异有统计学意义。结果 CUPJO患儿术中肾盂尿的FOS浓度为（4.37±3.01）ng/ml，术前晨尿为（3.59±2.31）ng/ml，对照组晨尿为（1.51±1.22）ng/ml，CUPJO患儿术中肾盂尿和术前晨尿的FOS表达都明显高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）；结论 FOS表达水平可能成为先天性肾盂输尿管连接部梗阻早期诊断的一个指标，并有助于先天性肾盂积水严重程度的鉴别，可能为临床选择治疗方案提供参考依据。尿液FOS作为一个有效的生物标志物，在小儿先天性肾盂输尿管连接部梗阻的诊断及长期随访中具有较好的应用前景。 　　关键词：先天性肾盂输尿管连接部梗阻；FOS；儿童 　　先天性肾积水是一种常见的导致肾功能受损的小儿泌尿系统疾病，约占新生儿的1%[1]，主要由泌尿系统先天性畸形引起，其中最常见的畸形是先天性肾盂输尿管连接部梗阻（CUPJO），占先天性肾积水的80%～90%[2]，CUPJO男女比例约为3：1，多发生于左侧，多表现为肾脏尿液浓缩功能下降，如不能得到早期诊断和治疗，肾功能将受到不可逆转的损伤，由于CUPJO对肾脏的损害程度决定了治疗方案的选择及疗效预测，因此如何判定梗阻程度及预测肾功能发展趋势，是临床研究的难点，寻找先天性肾盂输尿管连接部梗阻早期诊断标志物是急待解决的问题。有研究发现在小鼠发生肾盂输尿管连接部梗阻3d内，c-fos， CD44，CLU，SPP1和EGF的表达即发生了明显的变化，尤其是c-fos的表达上调最显著，且出现时间最早[3]，FOS是c-fos基因的表达产物，c-fos基因是一种细胞原癌基因，属于转录因子的早期即刻基因家族，本研究旨在了解CUPJO患儿尿中FOS的表达，探索其作为先天性肾盂输尿管连接部梗阻早期诊断指标的可能性。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 2014年3月～2016年4月在新疆维吾尔自治区人民医院小儿外科治疗的肾盂输尿管连接部梗阻患儿38例为病例组，诊断标准参照《实用儿科学》第七版[4]。其中男28例，女10例，年龄2个月～11岁，平均年龄（51.70±42.37）月；维吾尔族20例，汉族12例，其它民族6例。同时期在新疆维吾尔自治区人民医院儿童保健门诊进行体检的健康儿童22例作为健康对照组，其中男14例，女8例，年龄（48.23±35.63）月。两组的性别（χ2=0.670，P0.05）和年龄（t=0.856，P0.05）分布均无显著差异，见表1。 　　1.2方法 　　1.2.1标本的采集 采集病例组与对照组儿童尿液10 ml，4000rpm 离心15min，将上清液转移至新的15ml离心管中，-80℃保存备用。 　　1.2.2 FOS的测定 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测尿液中FOS浓度，检测试剂盒由Elabscience公司生产，产品货号：E-EL-H0695c，实验操作步骤为：①稀释标准品：加入1ml稀释液至冻干标准品中，取0.5ml 10ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml稀释液的EP管中混匀，如此反复做倍比稀释；②加样和温育：按加样方案向相应微孔分别加100μl标准品或待测样本，将反应板充分混匀后置37℃温育1h；③洗板：倒掉微孔板内液体，用稀释后的清洗缓冲液洗4次，向滤纸上印干；④酶结合物温育：加100μl酶结合物至每一微孔，37℃温浴30min。洗板：如前；⑤底物温育：滴加90μl底物液至每一微孔，37℃避光温育15min。⑥终止反应：以与加底物液相同的速度和顺序滴加50μl终止液至每一微孔；⑦测定结果：450nm处测吸光值；⑧结果计算：以标准品10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0 ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，使用EXCEL2003作图，画出标准曲线，根据样品OD值计算相应FOS含量。 　　1.3 统计学方法 采用EXECL2003和SPSS13.0软件进行数据收集和处理，FOS浓度以均数±标准差（x±s）表示，组间FOS浓度的比较采用两独立样本t检验；计数资料的比较采用χ2检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　先天性肾盂输尿管连接部梗阻患儿术中肾盂尿FOS浓度为（4.37±3.01）ng/ml，术前晨尿为（3.59±2.31）ng/ml，对照组晨尿为（1.51±1.22）ng/ml，先天性肾