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加热法预防快速冷冻切片脱片应用体会 　　摘要：目的 探讨如何提高快速冷冻切片质量的技术和方法，防止快速冷冻切片脱片，提高快速冷冻切片的速度。方法 每日随机选取术中送检快速冷冻的新鲜标本，同一标本取两块相近组织，其中一块使用传统常温的快速冰冻切片方法进行制片，另一块使用自我摸索的载玻片加热新方法进行制片。然后将两种方法对照，并分别观察两组冷冻制片染色后的效果。结果 加热组的快速冷冻制片中只出现一例子宫肌瘤脱片，脱片发生率仅为0.2%。而常温组中却有26例发生不同程度掉片，脱片发生率为5.2%，且以子宫肌瘤和宫颈组织的脱片发生率最高。结论 使用载玻片加热的新方法进行快速冷冻切片能很好地防止组织脱片，可以有效缩短快速冷冻的制片时间。 　　关键词：快速冷冻切片；脱片；加热；速度；质量分析 　　在快速冷冻切片中，时间是快速冷冻切片的关键[1]。有些组织在制片过程中会发生脱片，再次切片必然会延缓快速冷冻切片速度，不能为诊断医生提供相对充裕的诊断报告时间。为此，我们尝试了一种新的快速冷冻制片方法（简称新方法）进行不断尝试，旨在证明其是否真的可以防止快速冷冻切片的组织脱片。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 收集南京市妇幼保健院病理科快速冷冻送检的新鲜标本500例，每例取两块部位相近、厚薄一致且大小相似的组织。随机分为两组：其中一块组织使用传统规范的快速冷冻方法进行制片，另一块组织使用新方法进行快速冷冻切片。 　　1.2仪器 制片所用机器型号为德国莱卡CM1900冰冻切片机及其配套的组织托、OCT包埋剂、一次性刀片和甲醇固定液。 　　1.3方法 　　1.3.1常温组 这是传统方法。将待切组织块切面朝上，放在组织托中央，OCT包埋剂包埋，待组织块冷冻变硬后切片，常温下载玻片写上编号，然后进行贴片。载玻片贴片后立即放入固定液中固定，固定时间为10～15 s；水洗；苏木素2 min；水洗；盐酸酒精分化1 s；水洗；温水蓝化；伊红5～10 s；最后梯度酒精脱水、二甲苯透明及中性树胶封固。 　　1.3.2加热组 我们称其为新方法。将组织托放在流水下冲洗几秒钟，甩去多余的水，待切组织块切面朝上，放在组织托中央，OCT包埋剂包埋，待组织块冷冻变硬后切片。同时将载玻片写上编号放入恒温干燥箱（温度设置在65℃～75℃间）中加热约1 min，取出后在室温中稍加冷却即可贴片。贴片后的处理同传统常温组。 　　1.3.3切片评价 将两组切片交由两位不了解分组信息的病理医生镜下观察，然后按照江苏省诊断和技术规范对其进行评价。 　　2结果 　　通过将载玻片加热的新方法制作的快速冰冻切片，我们观察发现在具体切片环节与常温组无明显差异。经快速冷冻切片染色后，镜下观察细胞浆呈淡红色，细胞核呈蓝紫色，核浆对比分明，色泽鲜艳，无皱褶，组织结构清晰，层次分明。其质量与常温组冷冻切片相比不相上下，甚至在某些方面胜过常温组制片质量。更重要的是，新方法中快速冷冻切片组织几乎不出现脱片，基本不需要重新制片，有效地提高了快速冷冻的切片时间和切片质量，见图1～6。由图可见，宫颈、软骨及乳腺脂肪组织在快速冷冻切片常规制作中很容易发生脱片，而我们的新方法加热组中则能使切片保持较好的完整性。如表1所示，我们分别选取了妇产科常见的几种不同瘤体组织，具体包括乳腺、子宫肌瘤/腺肌瘤、卵巢肿瘤、子宫内膜及宫颈疾病组织。新方法的快速冷冻制片中只出现一例子宫肌瘤脱片，脱片发生率仅为0.2%。而常温组中却有26例发生不同程度脱片掉片，脱片发生率为5.2%。其中，子宫肌瘤和宫颈组织在传统常温冷冻制片中的脱片发生率最高，见表1。加热组的脱片发生率与常温组相比有很大差异，且差异有统计学意义（P0.05；χ2=23.790，P=0.000）。 　　3讨论 　　3.1快速冷冻切片的基本条件及注意事项[10] 　　3.1.1要做好准备工作。首先刀要锋利，一次性刀片要定时更换。要保证冷冻切片机24h处于备用状态，预定好冷冻温度和除霜时间。 　　3.1.2在恒温干燥箱中烤切片，时间不能过长，以不超过1min为宜，否则会使组织干燥而影响染色。 　　3.1.3切片手法要熟练，技术员要熟练掌握机器性能和冷冻切片方法，熟练掌握不同组织的适宜温度和其他相关条件，只有不断实践才能逐步积累经验。 　　3.1.4冷冻切片通常比石蜡切片厚，细胞由于未固定往往偏大。在制片过程中要根据不同的组织调节不同的温度，有时温度过低会使组织过脆、切片撕裂；带有脂肪的组织往往不易成片而引起折叠，有时染色不佳影响观察，或冷冻过度时细胞内会出现冰晶现象。 　　3.1.5术中冷冻切片快速诊断，要求病理医师准确取材，不要仅限1块，应取2～3块为最佳，并要求技术员要认真仔细观察不断总结经验才能制作良好切片，保证冷冻诊断质量。