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南美叉柱花离体培养与快速繁殖 　　摘要：以叉柱花幼嫩枝条为外植体，建立了快速无性繁殖体系。结果显示：采用0.1%的升汞溶液消毒处理10min最为合适；诱导不定芽最佳增殖培养基配方为改良Ms培养基+6-BA 2.0mg/L+KT 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L；生根培养基配方为改良的MS培养基+NAA 1mg/L+IBA 0.1mg/L。该离体培养方法能提高叉柱花的繁殖系数，有效缓解当前种苗不足和缩短上市时间，满足市场需求。 　　关键词：叉柱花；组织培养；快速繁殖 　　观赏水草在水族箱中有着重要的地位，随着人们对水草的喜爱，已经发展成为以水草为主的观赏水族箱。南美叉柱花（Staurogynerepens），也称叉柱花，是一种双子叶植物，属于爵床科叉柱花属，分布于巴西、委内瑞拉等地，虽然近年来才刚刚引入我国，但是得到市场的认可，市场上往往供不应求。南美叉柱花的繁殖主要依靠对成年的匍匐茎进行分株，繁殖系数较低，同时成本较高。其属于短日照植物，在每年11月以后常常开花，引起植物早衰，叶片变黄，失去欣赏价值，不仅导致经济价值下降，而且在秋冬季节市场上产品缺乏。随着生物技术的发展，特别是植物组织培养技术的日趋成熟，利用植物工厂生产花卉，果树等的种苗已经广泛应用，比如香蕉、番木瓜、蝴蝶兰、杨树、铁皮石斛等。近年来一些观赏水草如水榕、红椒、绿椒、皇冠、红波等也已经成功建立了组织培养技术体系，有些品种开展了工厂化育苗，但是还没有工厂化生产叉柱花的报道。组织培养技术能够在短期内大量提供南美叉柱花的种苗，同时通过室内培养避免其受光周期诱导开花。本研究通过对影响叉柱花组织培养及快速繁殖的因素进行了相关探索，以期为叉柱花的工厂化组培育苗提供技术方案，保障周年供应市场。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　2014年春季在南宁花鸟市场购买生长健壮的叉柱花成苗，培养在亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室玻璃温室。 　　1.2培养基与培养条件 　　改良MS培养基（MX）：改良MS培养基的配方为：用Ca（NO3）2?4H2O代替原MS培养基中的CaCl2?2H2O并添加抗坏血酸，其他组分均无变化；其中Ca（NO3）2?4H2O的浓度为95mg/L，抗坏血酸的浓度为5mg/L；丛芽增殖培养基：在MX培养基中添加适量的6-BA、KT、NAA；生根培养基：在MX培养基中添加适量的I-BA及NAA。所有培养基附加蔗糖30g/L、琼脂5.5g/L，pH值调至5.8±0.2，经121℃高压灭菌20min。培养条件：温度25±3℃，湿度为65%～80%，光照度800Lx，光照时间10h/d。 　　1.3外植体消毒处理 　　选取叉柱花幼嫩的枝条作为外植体，去除叶片，用自来水冲洗30min，然后用吸水纸吸干枝条表面水分。在超净工作台上，将洗净的枝条切成带有1～2个芽的茎段，先用70%酒精清洗30s，再用无菌水冲洗3次，每次3min，立即转入含有吐温的0.1%的升汞溶液中分别浸泡7、9、11、13min，晃动烧杯，让材料充分接触消毒剂，最后将材料用无菌水洗涤3次，每次5min，得到消毒外植体备用。 　　消毒好的茎段切除与消毒剂有接触的两端，接种于诱导培养基MX+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L中，每个消毒处理30个芽。于1 5d后统计污染率和萌芽率。 　　1.4丛芽的增殖 　　取诱导得到的初代材料，接种于丛芽增殖培养基，培养基中激素的组合和浓度如表1所示，进行继代培养21d，比较不同浓度的6-BA和KT对叉柱花丛芽增值的效果，统计20个芽的增殖情况。 　　1.5叉柱花生根诱导 　　将叉柱花丛芽切成带有1～2不定芽的茎段，然后将生物学底端插入生根培养基中。培养基以MX为基础，添加不同浓度的NAA和IBA，浓度见表2。进行生根培养1 5～20d，统计20株再生植株根的数量和长度。 　　1.6叉柱花的种植 　　当叉柱花幼苗生的根长至1～2cm、苗高3cm以上后，将培养瓶瓶盖打开，室内炼苗培养7d，然后洗净根部培养基，浸泡0.1%多菌灵溶液10min，将组培苗根部用适量消毒后的岩棉包裹，固定在直径5cm，高6cm的塑料镂空杯中，种植在遮光率为50%的塑料大棚的水池中，保持叶面湿度。 　　2结果与分析 　　2.1外植体消毒 　　经过消毒处理后的外植体在诱导培养基上，7～10d腋芽开始萌动，在21d已经有丛芽（图1）。按1.3方法对叉柱花外植体进行消毒，70%的酒精处理20s后，再以0.1%HgCl2作4种不同时间的处理，对其污染率、萌芽率和死亡率进行统计，结果如表3。本研究中，叉柱花外植体污染主要为细菌污染，没有出现真菌污染，可能是采用酒精和氯化汞相结合的2次消毒的结果。外植体的污染率与0.1%HgCl2处理时间的长