原人参二醇空心金纳米药物载体制备及体外抗喉癌研究.docVIP

原人参二醇空心金纳米药物载体制备及体外抗喉癌研究 　　摘 要 原人参二醇（PPD）对多种肿瘤细胞具有抑制作用。但由于水溶性差、利用度低，限制了其在临床上的应用。基于此，本研究以空心金纳米颗粒为PPD的运输载体，合成PPD空心金纳米颗粒，采用高效液相色谱分析PPD空心金纳米药物载体的缓释效应性、MTT法检测对Hep-2细胞增殖的抑制作用、流式细胞术研究对Hep-2细胞凋亡的影响，以考察原人参二醇（PPD）空心金纳米药物载体的体外抗喉癌细胞Hep-2效应。结果表明，PPD空心金纳米药物载体具有缓释效应性，与空白对照组、HAuNs组及PPD组相比，HAuNs-PEG-PPD组的Hep-2细胞生存率下降更显著， 细胞凋亡率增加更显著 （p0.01）。PPD空心金纳米载体可显著增强PPD的体外抗喉癌细胞效应，促进肿瘤细胞的凋亡，有望成为PPD新型纳米药物，并应用于喉癌的治疗研究。 　　关键词 原人参二醇；空心金纳米颗粒；喉癌；细胞凋亡 　　1 引 言 　　原人参二醇（PPD）作为中国传统中草药人参的主要成分，对多种肿瘤具有抑制作用[1～8]。然而PPD水溶性差，临床生物利用度很低。纳米药物系统作为一种新型给药系统，由于其副作用较小、药物生物利用度与疗效较好，受到研究者的广泛关注。在各种纳米药物系统中，含有高Z元素 （金，银，碘，钆等）的各种纳米材料作为药物运输载体[9～11]引起研究者的广泛关注。金纳米颗粒 （AuNPs）由于其良好的生物相容性、生物惰性、高原子序数、易于合成和表面修饰等，在纳米药物系统中表现出明显的优势，是药物运输载体的优良材料[12～20]。You等[21]将DOX负载到PEG 修饰的空心金纳米颗粒上，考察该药物传递系统（DOX@ PEG-HAuNS） 的光热治疗-化疗的联合治疗效果，结果表明，相比于游离DOX 和DOX 脂质体，DOX@ PEG-HAuNS 具有更强的抗肿瘤活性和更低的心脏毒性。 　　基于空心纳米金颗粒的独特性质，本研究将空心金纳米颗粒用于小分子PPD的负载输送。将具有空心结构、体积大、外壳薄而坚固等优点的空心金纳米颗粒和PPD结合起来，构建了一种新型PPD给药系统；PPD经过空心金纳米颗粒的负载，提高了药物的水溶性及生物利用度，更利于肿瘤的治疗。将PEG分子修饰到空心金纳米颗粒表面，提高了纳米材料的生物相容性； 空心金纳米颗粒负载PPD，起到了缓释作用，使得PPD的药效更加持久。本研究还考察了其体外抗喉癌细胞的作用。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　FEITecnai G2 F20 S-Twin透射电子显微镜 （美国FEI公司）； XPert Pro X射线衍射仪 （荷兰帕纳科公司）； Vertex Perkine-Elmer 580BIR傅立叶变换红外光谱仪 （美国瓦里安公司）； Prominenece UFLC高效液相色谱仪 （日本岛津公司）； U-3310紫外可见近红外光谱（HPLC）仪 （日本日立公司）； M630多功能酶标仪 （美国Hercules公司）； FACSCan流式细胞仪 （美国Becton Dickinson公司）； MCO-20AIC CO2培养箱 （中国Sanyo公司）。 　　氯金酸 （分析纯，上海萨恩化学技术有限公司）； CoCl2?6H2O、柠檬酸三钠和NaBH4 （分析纯，北京化学有限公司）； PEG-SH （美国Nanocs 公司）； Hep-2细胞株 （中国科学院上海生命科学研究院）；PPD （纯度99%，吉林大学有机化学实验室合成）； RPMI-1640培养基、胎牛血清（美国 Hyclone公司）； 二甲亚砜（DMSO）、青霉素和链霉素（上海鼎国生物技术有限公司）； MTT（美??Sigma公司）； TUNEL凋亡检测试剂盒（瑞士罗氏公司）。实验用水为Milli-Q纯水仪（美国Millipore公司） 制备的超纯水（18.2 MΩ?cm）。 　　2.2 空心金纳米颗粒 （HAuNs）的合成 　　参照文献[22]的方法合成空心金纳米颗粒（HAuNs）。首先制备钴纳米颗粒，将氯化钴溶液 （0.1 mL， 0.4 mol/L）加入到含有新制备的硼氢化钠溶液 （0.1 mL，1 mol/L）和柠檬酸钠溶液 （0.4 mL，0.1 mol/L）中，混合溶液在氮气氛下反应60 min。将上述制备的无硼氢化钠的钴纳米颗粒溶液 （30 mL）注入脱氧氯金酸溶液 （10 mL， 1 μmol/L）中，在氮气氛下反应10 min后，将溶液暴露于空气中至钴完全氧化。以10000 r/min离心，收集沉淀， 用超纯水洗涤3次。 　　2.3 HAuNs-PEG的合成 　　通过配体交换法制备HAuNs-PEG[23]。将合成的HAuNs分散在去离