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原发性肝癌患者外周血T细胞亚群检测临床意义 　　摘要：目的 探讨外周血T细胞亚群检测在原发性肝癌（简称肝癌）患者中的水平变化及临床意义。方法 选取我院2011年1月～2013年6月收治的86例肝癌患者及同期选择来我院进行健康体检者86例体检者为研究对象，分为由86例肝癌患者组成的实验组和由86例正常体检者组成的对照组；采用免疫细胞化学法测定两组所有成员的外周血T细胞亚群（CD3、CD4、CD8、CD4/CD8）水平。结果 经外周血T细胞亚群检测后实验组的CD3、CD4、CD4/CD8水平低于正常对照组，CD8水平高于对照组；且实验组CD3、CD4/CD8的值与对照组在比较上，差异具有高度统计学意义（P0.05）。结论 肝癌患者免疫功能明显异常，检测外周血T细胞亚群水平有助于了解肝癌患者机体免疫功能状况。 　　关键词：原发性肝癌；T细胞亚群；免疫细胞化学法SAP；CD 　　原发性肝癌，是我国恶性肿瘤中较常见的疾病之一。T细胞亚群的测定是检测机体细胞免疫功能的重要指标，且对某些疾病的辅助诊断、分析发病机制、观察疗效及监测预后有重要意义。我院对2011年1月～2013年6月86例确诊为原发性肝癌患者的外周血T细胞亚群水平与对照组的T细胞亚群水平进行了对比分析，探讨了原发性肝癌患者外周血中T细胞亚群的改变及检测的临床意义，旨在为今后原发性肝癌的临床检测提供参考依据，现将结果报告如下。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 选取2011年1月～2013年6月由我院收住的86例肝癌患者作为实验组，其中男性患者56例，女性患者30例；年龄36～55岁，中位年龄43岁。将同期选择来我院参加体检的86例健康体检者作为对照组，其中男性56例，女性30例；年龄35～57岁，中位年龄38岁。两组成员在性别构成比以及年龄分布的比较上，差异无统计学意义（P0.05）。 　　1.2病例选取标准 所有患者均依据2001年中国抗癌协会制定的原发性肝细胞癌诊断标准确诊为原发性肝癌患者，且所有患者检测前均未接受任何形式的放疗和化疗的治疗方案，也未使用任何对免疫系统有影响的药物，排除严重心脑血管疾病、精神障碍以及全身其他部位恶性肿瘤的患者。 　　1.3方法 标本制备：抽取患者空腹静脉血3ml，肝素抗凝，用PBS缓冲液等体积稀释，用天津市源洋生物制品科技有限责任公司提供的人外周血淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，用PBS缓冲液洗涤2次后，用剩余的PBS缓冲液将细胞吹打混匀，涂在用防脱片剂处理过的载玻片上，37℃温箱烤干备检，采用免疫细胞化学法SAP法，试剂盒由北京中杉金桥生物制剂公司提供。实验操作由经验丰富的主管检验师把关，每批实验均设PBS液替代第一代抗体的空白对照。标本经固定液固定2～3min后，加入CD3、CD4、CD8单抗，-4℃过夜：加入生物素标记羊抗小鼠IgG单抗适量，37℃孵育30～45min，专人盲法镜检，高倍镜下选取染色好的视野计数100～200个单个核细胞，细胞表面有红色标记物为阳性细胞，计算阳性百分数。 　　1.4统计学处理 采用SPSS13.0统计软件包进行统计学分析，数据的比较采用t检验，检验水准a=0.05。 　　2 结果 　　2.1 T细胞亚群检测结果 实验组患者的外周血CD3、CD4/CD8值均明显低于对照组，两者在比较上，差异具有高度的统计学意义（P0.05），见表1。 　　3 讨论 　　近年来，大量研究表明，宿主细胞免疫功能的改变与肿瘤的形成密切相关，机体的细胞免疫异常可使外周血的T淋巴细胞受到抑制，从而导致肿瘤细胞逃避宿主的免疫监视，最终发生肿瘤，同时，恶性肿瘤所引发的具有免疫功能的细胞活性降低，也是导致集体免疫平衡失调的重要原因之一。T细胞亚群是细胞免疫的主要免疫应答形式，根据表型不同分为CD3、CD4、CD8三类，其中CD3分子表达于所有成熟T淋巴细胞的表面，是总T细胞重要标志，CD3的水平能反映T细胞的数量及功能，CD4具有辅助、诱导T细胞标志，是主要的免疫应答细胞，CD8则是抑制、杀伤性T细胞标志，具有抑制诱导及细胞毒性功能，对靶细胞有细胞毒作用的同时对CD4细胞具有调节抑制作用[1]。在正常情况下以上三类细胞是处于动态平衡状态，CD4/CD8维持在1.5～2.0，此比值可反映机体的免疫功能，如机体免疫功能发生异常则CD3、CD4、CD8T细胞亚群细胞会出现数量的变化，引起一系列的病理改变。 　　肝癌是一种常见的恶性肿瘤，其发生率极高，且常伴有T细胞亚群的改变和功能的损害，其发生可能与免疫功能下降、免疫监视出现异常有密切关系。机体免疫状态失衡后，机体的抗癌能力会进一步下降，肿瘤细胞生长速度更加迅猛，病情会更加恶化，甚至出现转移。临床研究显示各系统恶性肿瘤均存在CD3、CD4胞的降低[2-3]，可