头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMPcGMP含量影响.docVIP

头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMPcGMP含量影响 　　吴绪平　周　爽　刘又香　王亚文　黄　蓉　孙国杰 　　(湖北中医学院,武汉*430061) 　　摘　要　为探讨头穴透刺治疗急性脑栓塞对血浆中cAMP、cGMP含量的影响,用线栓法直接阻断大鼠大脑中动脉开口处制作急性脑梗塞动物模型,应用放免技术,检测头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP、cGMP含量的影响。结果:头穴透刺后,血浆中过度降低的cAMP含量明显升高,过度升高的cGMP含量逐渐下降,病理性减小的cAMP/cGMP比值增大,并均趋于正常值水平。提示头穴透刺可以调节急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP、cGMP的含量及二者的比值。 　　主题词　脑梗塞/针灸疗法　cAMP/血液　cGMP/血液　头针　透针 　　 　　头针治疗脑源性疾病效果显著,尤其是对急性脑梗塞的治疗受到越来越广泛的关注。为了进一步探讨其作用机制,本工作动态观测了头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP、cGMP含量的影响。 　　 　　1　材料与方法 　　1.1　实验动物与分组 　　选健康SD大鼠(250～280 g)90只,雌雄各半(同济医科大学实验动物中心提供,采用笼养方式)。随机分为正常对照组(10只)、模型组(40只)、治疗组(40只)。模型组和治疗组再按不同时相随机分为4个小组,即6 h、24 h、48 h、72 h,每小组10只。各组饲养方法与实验室环境等条件均相同,正常组无须作任何处理,直接取全血样本,模型组造模后不予针刺,按不同时相采血,治疗组造模后行头穴透刺,也按不同时相采血。 　　1.2　动物模型的制作 　　将大鼠经腹腔注射6%水合氯醛(0.6 ml/100 g)后仰卧于恒温手术台上,切开右侧颈部皮肤,分离、结扎右侧颈总动脉、颈外动脉及其分支,分离右侧颈内动脉(ICA),近端备线,远端放置动脉夹。于颈总动脉上距分叉0.5 cm处切口,插入1.5号尼龙线(头端烤化呈光滑球形,直径达0.25 mm左右,并具有一定的弹性和硬度)18～20 mm。栓线进入ICA,穿过大脑中动脉(MCA)起始端至大脑前动脉近端,阻断MCA的所有血液来源。扎紧备线,剪去多余线头,缝合皮肤。在手术结束麻醉醒后,观察其神经症状,按照Kuluz神经缺损三级评分标准[1],选择符合二级者,即行走时身体向偏瘫侧转圈者作为实验观察对象。 　　1.3　头穴透刺方法 　　按照中国针灸学会实验针灸研究会1992年制定的《实验动物穴位定位标准》,取百会透前顶,沿皮刺入6 mm,病灶侧率谷透悬厘,沿皮刺入6 mm,接通上海产G-6805治疗仪,选用疏密波,强度为1 mA左右(以大鼠肢体震颤为度),频率为30 Hz,每次通电30 min。造模麻醉清醒后即刻针刺1次,此后每日1次(即6 h组针刺1次,24 h组针刺2次,48 h组针刺3次,72 h组针刺4次)。 　　1.4　样品制备 　　用心脏穿刺采血法抽取全血1.5 ml加入预置有50 μl EDTA?2 Na抗凝剂的试管内,摇匀后置冰浴中,1 h内离心(2000 r/min,10 mins)。取上清液0.1 ml移入试管,加入无水酒精2 ml,振摇1 mins,静置5 mins后离心(3000 r/min,10 mins),取上清液移入干净的青霉素小瓶内,剩余残渣加75%酒精1 ml,振摇均匀以打碎块状物后再离心(3000 r/min,10 mins),合并上清液于青霉素小瓶,烘干后置于4 ℃恒温箱中保存待测。 　　1.5　样品测定 　　测定用放免药盒由上海中医药大学同位素室提供,采用上海核福光电仪器有限公司生产的SN-682型放射免疫γ计数器检测。全部程序按药盒说明书进行。 　　 　　2　结果 　　本实验所得数据,全部输入电子计算机进行统计学分析,采用组间配对?t?检验方法进行显著性检验。所得结果如下。 　　2.1　头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP含量的影响(见表1) 　　由表1可见,模型组血浆中cAMP含量明显低于正常组(6 h、24 h组,P0.01),随着时间的推移,其含量有小幅度的回升,但仍具有显著性差异(48 h、72 h组,P0.05);头穴透刺治疗后,血浆中cAMP含量逐渐上升,并于72 h基本恢复正常,与模型组比较,差异有显著性意义(P0.05)。提示头穴透刺可以明显提高急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP含量。 　　2.2　头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cGMP含量的影响(见表2) 　　由表2可见,模型组血浆中cGMP含量明显高于正常组,差异具有非常显著性意义(〖WTBX〗P0.01),头穴透刺治疗后,血浆中cGMP的含量逐渐下降,并渐趋于正常值水平,与模型组比较(48 h组P0.05,72 h组P0.01)差异具有显