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姜黄素对草鱼急性肝损伤保护作用研究 　　摘要：以CCl4诱导的草鱼（Ctenopharyngodon idellus）急性肝损伤模型为基础，考察姜黄素对肝脏组织的保护作用。对草鱼腹腔注射不同剂量CCl4-橄榄油后，分别于不同时间点测定血清中谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）活性，确定CCl4-橄榄油最佳注射剂量和作用时间；以建立的草鱼急性肝损伤模型为基础，采用不同浓度姜黄素（5、25、75、150、300 mg/kg）进行灌胃给药，观察草鱼血清和肝脏组织中相关生化指标变化情况。结果表明，用15%的CCl4-橄榄油腹腔注射（剂量为0.1 mL/10 g鱼体重）24 h后，使草鱼血清中GPT、GOT水平升高（P0.05）；同时，150 mg/kg姜黄素能显著（P0.05）抑制血清中GOT和GPT水平的升高。姜黄素对CCl4诱导的草鱼肝组织损伤具有保护作用。 　　关键词：草鱼（Ctenopharyngodon idellus）；CCl4；姜黄素；肝损伤 　　中图分类号：S943 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）06-1514-04 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.06.038 　　草鱼（Ctenopharyngodon idellus）是中国“四大家鱼”之一，是淡水养殖的主要品种，隶属于硬骨鱼类鲤形目鲤科雅罗鱼亚科草鱼属。随着鱼类集约化养殖的发展，养殖密度的迅速提高、人工配合饲料大量投喂、不规范药物的使用、水体环境的日趋恶化、饲料中营养成分的失衡与缺失以及饲料中存在有毒物质等不利影响因素越来越多，造成养殖鱼类代谢失衡，特别是对鱼类肝脏损害极为严重[1，2]。在鱼类中，肝脏是中间代谢的主要器官，也是重要的营养储存器官，易受多种病原体入侵，因此肝脏是毒理学、药理学等学科研究的主要对象之一[3，4]。 　　中草药制剂在水产养殖中日益受到重视，其安全、无残留、毒副作用小，不会产生耐药性，目前渔用的保肝护肝国家标准药物只有肝胆利康散[5]。现代药理研究表明，姜黄素具有抗炎、抗氧化、抗癌、抗HIV、抗肿瘤、调节血脂和抗老年痴呆等作用[6-8]。目前关于姜黄素治疗各种原因引起的肝损伤的研究较多，姜黄素对由CCl4诱导的大鼠肝细胞毒性有保护作用[9]，能显著降低血清中转氨酶活性，减轻肝细胞脂肪贮积、脂肪变性和肝脏炎性细胞浸润等，保护肝细胞[10-12]，可以减轻由肝毒剂诱导肝脏病变产生的胶原纤维和细胞炎症因子，防治或减轻肝纤维化，预防肿瘤细胞增殖而抑制肝脏肿瘤生成[13]。然而将姜黄素用于水产领域的保肝作用研究少有报道，本研究旨在探索姜黄素对草鱼肝损伤的保护作用，为进一步开发鱼类免疫调节和保肝中草药奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　健康草鱼，体重（50±5.0） g，购于武汉市武湖青鱼良种场。 　　CCl4（分析纯）购于国药集团化学试剂有限公司；不同浓度CCl4-橄榄油溶液（V/V，下同），配成9%、12%、15%、18%及21%的浓度。 　　羧甲基纤维素钠购于国药集团化学试剂有限公司，肝胆利康散购于武汉市中博水产生物有限公司，姜黄素购于宁波制药有限公司。肝胆利康散和姜黄素分别用0.5%羧甲基纤维素钠配制成不同试验浓度。 　　谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所科技有限公司。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 试验条件 试验在循环过滤水族缸中进行，装有充分曝气的自来水，试验期间pH 6.5～7.2，水温 24～34 ℃，DO5 mg/L。 　　1.2.2 急性肝损伤模型建立 健康草鱼随机分为6组，每组20 尾，禁食24 h后称体重，按 0.1 mL/10 g腹腔注射9%、12%、15%、18%、21%的CCl4-橄榄油溶液，空白对照组注射等体积橄榄油。注射后分别于24、48、72、96 h采样，每组取鱼5尾，尾静脉采血，4 ℃下静置1 h后3 000 r/min离心10 min，取上清得到血清；取部分肝脏组织用10%甲醛固定。血清中的GPT、GOT活性采用试剂盒进行测定；固定的肝组织制作石蜡切片并用HE染色。若动物在试验中死亡，则不进行测定。 　　1.2.3 姜黄素药效试验 草鱼随机分为8个组，每组20尾，即5个试验组（5、25、75、150、300 mg/kg姜黄素）、阳性对照组（肝胆利康散100 mg/kg）、损伤组及空白对照组，空白对照组和损伤组口灌0.5%羧甲基纤维素钠，试验组口灌相应剂量药物，按0.1 mL/10 g口灌给药1周。禁食24 h后，按0.1 mL/10 g腹腔注射15%的CCl4-橄榄油溶液，空白对照组注射等体积橄榄油，24 h后每组取鱼5尾