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家蝇幼虫提取物清除氧自由基作用 　　摘 要 探讨了家蝇Mucadorrtetica L．幼虫提取物对氧自由基的清除作用。采用脱氧核糖―铁体系和邻苯三酚自氧化体系分别测定了不同浓度的提取物对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除率，同时采用H：O：氧化体系测定了提取物的抗氧化值。结果显示家蝇幼虫提取物对羟自由基和超氧阴离子自由基的1乙分别为1．93 mg／mL和3．26mg／ml浓度为0．5％的提取物的抗氧化值为9．01 mg，为同浓度维生素C抗氧化值的I．29倍。 　　关键词 家蝇幼虫，提取物，氧自由基，清除，抗氧化 　　自由基被认为是人体衰老和某些疾病发生的原因之一。当人体内自由基产生过多或清除过慢时，就会引发机体受到损伤，加速机体的衰老并诱发各种疾病。人体内的自由基约95％以上为氧自由基，可引发脂质过氧化反应，导致生物膜结构异常及功能障碍，是参与多种疾病发生、发展与衰老过程的基础。 　　家蝇Musca domestica L．幼虫蛋白含量丰富，是一种潜在的食用蛋白资源，其蛋白营养价值超过FAO／WHO规定的优质氮源标准，并且体内富含维生素和微量元素。人类食用家蝇幼虫的历史已久，中国传统食品“八珍糕”古方中蝇蛆即为八珍之一，另据《本草纲目》载蛆“气味寒，无毒”，“治小儿诸疳等。随着家蝇养殖产业化的发展，家蝇幼虫作为食用资源已成为可能，王芙蓉等报道了脱脂蝇蛆蛋白不同组分的体外抗氧化活性，有关家蝇在衰老、抗氧化损伤的过程中活体内自由基的变化及其他外源物质对家蝇体内自由基浓度变化等的影响也有相继报道，本研究同时测定了家蝇幼虫提取物清除氧自由基中的羟自由基(?OH)与超氧阴离子自由基(O)的作用，并测定了提取物的抗氧化值，为开发利用家蝇保健产品提供了良好的理论依据。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1．1 材料 　　家蝇Musca domestica L．幼虫，由华中农业大学昆虫资源研究所提供。 　　 　　1．2 家蝇幼虫提取物的制备 　　清洗4龄家蝇幼虫，冷冻干燥，采用索氏脱脂法脱去脂肪后，经粉碎制得蝇蛆脱脂粉。取适量脱脂粉，用10倍量的蒸馏水分2次进行浸提。经4000r／rain离心15min，取上清液在沸水浴中加热10 min。再离心，取上清液，冷冻于燥，可制得家蝇幼虫提取物。 　　 　　1．3 提取物的主要成分分析 　　(1)粗蛋白含量测定采用微量凯氏定氮法。 　　(2)糖含量的测定采用苯酚―硫酸法。 　　(3)核酸的测定采用定磷法。 　　(4)灰分的测定采用高温灼烧的方法。 　　 　　1．4 提取物对羟自由基清除率测定 　　采用脱氧核糖―铁体系法，略有改进。 　　 　　 　　 　　2 结果与分析 　　 　　2．1 家蝇幼虫提取物的成分 　　家蝇幼虫提取物主要成分分析结果如表1。 　　 　　提取物均经沸水加热10 min处理，去除了大分子的热不稳定蛋白质。故凯氏定氮测得的粗蛋白含量主要是指热稳定蛋白、小分子肽和氨基酸。由表1可知，家蝇幼虫提取物中含有丰富的小分子生物活性肽、氨基酸和糖类，并有少量的核酸存在。糖和核酸与蛋白质存在的方式有待进一步研究。 　　 　　2．2 家蝇幼虫提取物对羟自由基清除能力 　　本实验分别测定了不同浓度家蝇幼虫提取物对脱氧核糖―铁体系产生的?OH的抑制作用，每个浓度梯度设6个平行，取平均值计算清除率，其结果如图1所示。 　　由图l可知，在家蝇幼虫提取物浓度为0．25―10mg／mL的范围内，提取物对脱氧核糖―铁体系产生的?OH表现出良好抑制活性，且浓度与清除?OH的能力呈现出较好的量效关系，趋势线方程为y：20．944Ln(x)+41．563，相关系数为0．9894。其清除率随着提取物的浓度增加而提高，清除率最高可以达到86．42％。特别是在提取物浓度为0．25―2．5 mg／mL的范围内，清除率提高很快，从10．06％提高到59．4％。经计算，家蝇幼虫提取物对?OH的IC50为1．93 mg／mL。 　　 　　2．3 家蝇幼虫提取物对超氧阴离子自由基清除能力 　　实验分别测定了不同浓度家蝇幼虫提取物对邻苯三酚自氧化体系产生的O／的清除率(每个浓度梯度设6个平行)，结果见图2。 　　由图2可知，提取物在0．25-10 m~／mL的浓度范围内，对邻苯三酚自氧化体系产生的O；具有很好的抑制作用。与抑制?OH的能力具有类似的量效关系，趋势线方程为y=16．108龃(x)+31．242，相关系数可达0．9991，经计算提取物对O／的ICso为3．26 mg／mL。 　　 　　2．4 家蝇幼虫提取物抗氧化能力 　　根据分子生物学及药理学的研究，物质在机体内的氧化作用常会涉及到过氧化物，游离基氧等。本实验选用H：O：作为氧化还原分