Taqman三重实时PCR快速检测原料乳中致泻性大肠埃希氏菌.pdfVIP

第4l卷第 10期 东 北 农 业 大 学 学 报 41(1o1：108-115 2010年 1O月 JournalofNortheastA culturalUniversity 0ct．2OlO Taqman三重实时PCR快速检测原料乳中 致泻性大肠埃希氏菌 张红宇，孟祥晨 ，姜 博，张伟钦 (乳品科学教育部重点实验室，东北农业大学食品学院，哈尔滨 150030) 摘 要：建立可对原料乳中致泻性大肠埃希氏茵(包括肠致病性大肠埃希氏茵、肠侵袭性大肠埃希氏茵和肠 产毒性大肠埃希氏茵)同时进行快速检测的Taqman三重实时PCR方法。以致病菌中常见的e 、ipan和It基 因 为 目的片段 ，选择 3种特异性引物和Taqman探针进行三重实时PCR扩增，研究反应的特异性、检测限和重复 性，并用所建立的方法对 38份原料乳进行检测。结果表明，扩增曲线形态 良好 ，对原料乳中其他常见致病菌无 交叉反应，对含致病菌为 1cfum·L 的乳样经2h增菌处理后检测结果呈阳性，对原料乳样重复性检测的CV值 均小于5％。完成全部检测过程只需大约6h。该方法快速准确，可应用于原料乳 中致泻性大肠埃希 氏菌的快速 检测和污染调查。 关键词：致泻性大肠埃希氏茵；Taqman；三重实时PCR；原料乳 中图分类号：TS207．4 文献标志码：A 文章编号：1005—9369(2010)10—0108—08 Taqmantriplexreal_timePCR assaysforrapiddetectionofdiarrhea- genicEscherichia coliinraw milk／ZHANGHongyu’，MENGXiangchen，JIANGBo， ZHANGWeiqin(KeyLaboratoryofDairyScience，MinistryofEducation，FoodCollege，Northeast AgriculturalUniversity，Harbin150030，China) Abstract：Arapidtriplexrea1．timePCRbasedonTaqmantechniqueofrthesimultaneousdetectionof dia~heagenicEscherichiacoli (includingenteropathogenicEcoilenteroinvasiveEcoliandenterotoxigenic E coil1inrawmilkwasdeveloped．ThreekindsspecificprimersandTaqmanprobeswereusedtoamplify thefrequenttargetgeneseae,ipaH and Itofpathogenicbacteria．Specificity．sensitivityaswellasre— producibiliytoftheTaqmantriplexreal-timePCRassayswerestudied．anddiarrheaEcoliin38rawmilk sampleswasdetected bythismethod．Theresultsshowedtahtamplification curve reflectedwell，and cross--reactivitywasnotseenwithanyofthenegativecontrolculturesofotherfood--bornepathogensfound frequently inraw milk．When artificialpolluted milkwas cultivated for2 h，in which concentration of pathogenicbacteriawas1cfu·mL～．detectionresultpresentedpositive．Coeffi