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完全人源化单克隆抗体进展解析 　　摘要：近几年的研究和实践中发现，因鼠源性单克隆抗体会产生免疫反应，因此逐渐被人源化抗体所代替。本文出于对完全人源化单克隆抗体的研究情况进行了解的目的，从人源化抗体的构建策略、人源化抗体的表达、人源化抗体的临床应用等方面进行了阐述。 　　关键词：完全人源化抗体 单克隆抗体 构建策略 表达系统 临床应用 　　Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.11.033 　　【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）11-0026-01 　　自1975年Kohler和Milstein报告B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体后，单克隆抗体药物在临床治疗中迅速发展起来。现阶段已经进入到临床或者是临床试用的单克隆抗体均为治疗难治性疾病如病毒性感染、恶性肿瘤、风湿性关节炎、传染性疾病、自身免疫系统以及心血管疾病等，然而需要注意的是，鼠源性单克隆抗体在应用到人类体内后会产生较强的免疫原性，进而诱发抗鼠抗（HAMA）反应，致使抗体在人体内被迅速的清除，缩短半衰期，严重时还会产生免疫反应性疾病等 [1]。近几年人源化单克隆抗体逐渐代替了鼠源性单克隆抗体在临床上得到了广泛应用。本文从人源化抗体的构建策略、人源化抗体的表达、人源化抗体的临床应用等方面展开了综述，详见下文。 　　1 人源化抗体的构建策略 　　鼠抗体人源化是利用基因进行改造的，使其和人体内的抗体分子会产生极其相似的轮廓，进而逃避了免疫系统的识别，使HAMA反应的发生得到有效的避免。对鼠源性抗体进行人源化改造的过程中应注意遵守两个原则，首先应保持抗体的亲和力和特异性，其次是应使抗体的免疫原性降低或者是消除 [2]。 　　1.1 嵌合抗体。嵌合抗体是利用人源化基因对鼠源性单抗的恒定区进行替代，这种方式所构建的嵌合抗体不但使抗原抗体结合的特异性得到保留，同时大大降低了鼠源性单克隆抗体的免疫原性。 　　1.2 CDR移植抗体。出于减少鼠源成分的目的，研究出了CDR移植抗体或者是改型抗体，使其成为完全的人源化抗体，也就是真正意义上的抗体人源化。抗体中除了有3个互补的决定区为鼠源性外，其他军事人源结构。譬如说目前应用的国家Ⅰ类癌症治疗新药“泰欣生”，即“泰欣生重组人源化抗人表皮生长因子受体单克隆抗体”，其利用先进的CDR移植技术，使人源化程度达到了95%甚至更高，安全性得到显著提高，显著降低了毒性作用 [3]。 　　1.3 SDR移植抗体。与嵌合抗体比较，尽管CDR移植抗体时鼠源成分得到明显减少，但是有时异基因的CDR人源化抗体会存在引起抗个体基因型反应的可能。特定决定区（SDR）转移抗体把异源抗体中同抗原紧密结合的SDR等少数残基移植到人抗体相应的位置上，使抗体的异源性得到进一步的降低，该方法的应用使人源化的抗体潜在的免疫原性降到了最低水平。 　　1.4 全人单克隆抗体。抗体库筛选技术。抗体库筛选技术中包括有噬菌体表面展示技术、核糖体展示技术两种，其中噬菌体展示技术利用PCR技术自生物体内扩增出整套编码人抗体的基因序列，克隆到噬菌体载体上，而后通过融合蛋白的形式表达到噬菌体的表面，进而能够方便的利用抗原-抗体特异性结合展开筛选和扩增。该项技术不但能够获得与人体性质的单克隆抗体，并且利用抗原直接自库中对所需基因进行了筛选，无需细胞融合，不需要通过动物免疫，实验的周期明显缩短，操作简单，为人源抗体制备的一项重大突破。 　　核糖体展示技术则是将基因型和表型联系在一起，编码蛋白的DNA在体外进行转录与翻译，因对DNA进行了特殊的加工以及修饰，譬如说将3’末端的终止密码子去掉。核糖体在翻译至mRNA末端后，因缺失了密码子，使其停留在mRNA 3’末端无法脱离，进而产生蛋白质-核糖体-2mRNA三聚体，把目标蛋白特异性的配基进行固相化处理，而后展开筛选，对筛选分离所得到的复合物展开分解，使mRNA得以释放，进行RT-PCR反应，PCR产物进入下一轮循环，经过多次反复的循环后能够使目标蛋白以及编码的基因序列得到富集以及分离。通过该技术可以获得特异性较强，亲和力较高的人源化抗体。 　　2 人源化抗体的表达 　　现阶段常用的人源化抗体表达系统以大肠杆菌体系、酵母体系、昆虫体系、哺乳动物细胞表达系统等。因完整的抗体分子为重链以及轻链经二硫键组成存在生物功能的免疫球蛋白，但是大肠杆菌体系缺少转录以及翻译后加工机制，因此所表达的蛋白质无法形成适当的折叠、糖基化修饰或者是正确形成二硫键等，因此在完整抗体分子表达中不适用，因此目前多用于高效表达Fv、Fab、ScFv等一些功能片段。酵母表达体系包括有酿酒酵母、克鲁胃酸酵母、裂殖酵母、甲醇酵母等表达系统，其中甲醇酵母为最近发展较为迅速的一种外源基因表达系统，