宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP基因及蛋白水平改变关系研究.docVIP

宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP基因及蛋白水平改变关系研究 　　[摘要] 目的 研究宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP基因及蛋白水平改变的关系。方法 以我院收治的70例宫颈癌患者为观察组，另选正常宫颈组织70例为对照组。分别对两组对象的宫颈组织进行DNA提取、总RNA提取、cDNA合成、PCR反应扩增。并检测HPV感染、Rap1GAP基因外显子E11和E19缺失率、Rap1GAP mRNA表达及Rap1GAP蛋白表达情况。 结果 观察组患者HPV感染明显高于对照组（P 0.05）。Rap1GAP mRNA、Rap1GAP蛋白在观察组HPV阳性组组织中的表达率、阳性表达率明显低于HPV阴性组（P 0.05）。宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP mRNA的表达呈正相关（r=0.578），与Rap1GAP 蛋白的阳性表达呈正相关（r=0.554）。 结论 宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP mRNA的表达呈正相关，与Rap1GAP 蛋白的阳性表达呈正相关。 　　[关键词] 宫颈癌；HPV感染；Rap1GAP基因；Rap1GAP蛋白；关系 　　[中图分类号] R737.33 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）20-0037-04 　　在临床上，肿瘤一直是一种死亡率较高的病症，肿瘤疾病的发展过程，主要依靠一系列基因以及多阶段致癌，过程相对复杂，其发生机制主要是因为原癌基因被激活以及抑癌基因失活所致。在肿瘤疾病中，宫颈癌是一种常见的妇科恶性肿瘤疾病，是仅次于乳腺癌的肿瘤疾病，多发于发展中国家。而在近几年来，宫颈癌的发病群体日益扩大，年轻群体也存在着发病趋势。宫颈癌的发病诱因一般与多个因素影响有关，包括病毒感染、早婚早育、多产吸烟以及不良性行为等。Rap1GAP是近年来最新发现的与宫颈癌相关的抑制基因，其基因及蛋白水平的表达与宫颈癌组织HPV感染是否有关成为临床探讨的重要课题[1-8]。本文以我院2011年1月～2013年1月收治的70例宫颈癌患者为研究对象，探讨宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP基因及蛋白水平改变的关系，现报道如下。 　　1资料与方法 　　1.1临床资料 　　选择我院2011年1月～2013年1月收治的70例宫颈癌患者为观察组，所有患者均经手术病理证实为宫颈癌，年龄 28～65 岁，平均（45.4±5.4）岁。另选正常宫颈组织70例为对照组，年龄 27～63 岁，平均（46.7±6.3）岁。两组患者在年龄等一般资料的比较上，差异不存在统计学意义 ，具有可比性。 　　1.2试剂、仪器和方法 　　取两组对象的宫颈组织均分为2块，一块用10%甲醛予以固定，石蜡包埋。另一块速冻后置冰箱待检。 　　1.2.1主要试剂和仪器 主要试剂：RT-PCR 试剂盒、琼脂糖、Trizol试剂、DEPC、EB等；主要仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶图像分析系统、离心机、免疫组化对照系统等。 　　1.2.2方法 ①DNA的提取 根据试剂盒的操作说明，分别取两组的组织标本进行离心，洗脱DNA，于4℃温度下保存备用。②总RNA提取 分别取两组冷冻的组织标本离心处理，用DEPC水溶解RNA，采用凝胶成像系统对RNA的表达进行检测。③cDNA合成 根据试剂盒的操作说明，以提取的总RNA为模版，以随机引物做引物，进行cDNA合成。④引物设计 对Rap1GAP、β-actin及Rap1GAP的11号和19号外显子进行引物设计，引物设计方法见文献[2]。⑤PCR反应扩增 根据PCR仪的操作说明进行PCR反应扩增。⑥电泳及Rap1GAP mRNA表达 分别取两组3μL的Rap1GAP、β-actin的反应产物和Rap1GAPE11和E19的扩增产物在琼脂糖凝胶上进行电泳[6]。采用凝胶图像分析系统对电泳结果进行分析，检测Rap1GAP mRNA的表达结果[7]。⑦HPV感染检测 采用免疫组织化学法分别对两组对象组织中的HPV感染进行检测。感染判定标准[8]：阳性：细胞浆或细胞核出血棕黄色颗粒，5个高倍视野观察下，HPV（+）为阳性细胞30%[3]。⑧Rap1GAP蛋白的表达检测 将已知胃癌的组织切片作为Rap1GAP蛋白的阳性对照[4]。 　　1.3观察指标 　　①HPV感染情况；②观察组组织中Rap1GAP基因外显子E11和E19的检测结果；③观察组患者宫颈癌组织中Rap1GAP mRNA表达检测结果；④观察组患者宫颈癌组织中Rap1GAP蛋白表达检测结果。 　　1.4统计学方法 　　采用SPSSl0.0统计学软件，计量资料用（x±s）表示，组间比较应采用t检验，计数资料采用χ2检验，采用Spearman相关系数分析， P0.05表示差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1 HPV感染情况