T-2毒素诱导凡纳滨对虾肌肉蛋白质变化的规律-食品科学专业论文.docxVIP

T-2 毒素诱导凡纳滨对虾肌肉蛋白质变化的规律 摘要 饲料中 T-2 毒素污染情况严重，而 T-2 毒素可通过抑制 DNA 和 RNA 的合成，阻 断翻译的启动来抑制蛋白质的合成，T-2 毒素在对虾体内蓄积的过程也是肌肉品质变 化的过程，对虾长期暴露 T-2 毒素污染的饲料势必造成品质劣化。 本研究以凡纳滨对虾为研究对象，设定不同 T-2 毒素暴露剂量（0、1.2、2.4、4.8、 12.2 mg / kg·feed）的人工染毒饲料，提取染毒组和对照组的对虾肌肉蛋白质分类成 分，以凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定其含量，采用 SDS电泳分析可溶性蛋 白质构成变化，并采用常规理化方法对肌动球蛋白的 ATPase 活性、巯基含量和 ATP 感度进行分析。结果表明 T-2 毒素对肌肉蛋白质分类成分影响显著（p 0.05），高剂 量组 T-2 毒素引起肌动球蛋白降解，在水溶性蛋白中的 42 kD 条带灰度与 T-2 毒素暴 露剂量具有相关性，有望作为评价 T-2 毒素诱导凡纳滨对虾肌肉品质变化的潜在指示 物。T-2 毒素均对蛋白质性质有显著性影响（p 0.05），而且随 T-2 毒素暴露剂量增 加，Mg2+-ATPase 和 Ca2+-Mg2+-ATPase 活性逐渐降低。因此 Mg2+ 相关的目标酶，可 作为评价 T-2 毒素诱导凡纳滨对虾肌肉蛋白质品质变化的参考指标。 本研究建立及优化了凡纳滨对虾肌肉蛋白质双向电泳分离技术，结果表明：以液 氮研磨+超声破碎的提取方式，7M 尿素和 2M 硫脲为主的裂解液提取凡纳滨对虾肌肉 全蛋白，采用 7 cm，pH4-7 IPG 胶条，180 μg 被动水化上样，12.5 %二向分离胶和胶 体考染的方式，成功得到分离度和分辨度较高的 2-DE 图谱，为进一步探索 T-2 毒素 诱导凡纳滨对虾肌肉品质变化及筛选标记蛋白奠定了基础。 采用已建立的凡纳滨对虾肌肉蛋白质双向电泳分离技术对不同剂量组凡纳滨对 虾肌肉蛋白质进行分离，得到 30 个差异蛋白，其中与 T-2 毒素相关的差异蛋白点 12 个。应用激光解吸基质辅助飞行时间质谱联用技术（MALDI-TOF/TOF）对 12 个差 异蛋白点进行质谱分析得到其肽指纹图谱和二级质谱，通过 MASCOT 软件搜索数据 库同已得到的肽指纹图谱进行比对分析，共鉴定出 11 个蛋白点，1 个未知蛋白，11 个蛋白质点的同源蛋白分别是小泛素样修饰物-1（SUMO-1）、精氨酸激酶、磷酸丙糖 异构酶、抑制蛋白 112、精氨酸激酶 B 链、70kD 热休克蛋白（部分）和卵黄蛋白原。 12 个蛋白点的表达量随 T-2 毒素暴露剂量增加均呈先上调后下调趋势，而其中编号 2288 差异蛋白点（精氨酸激酶）在暴露于 T-2 毒素低剂量时表达上调，而暴露在中高 剂量时，蛋白点消失，说明精氨酸激酶对中高剂量 T-2 毒素表现出高度敏感性。因此， 精氨酸激酶可作为 T-2 毒素诱导凡纳滨对虾肌肉品质变化的标记蛋白。 综上所述，T-2 毒素对凡纳滨对虾肌肉蛋白质影响显著。从蛋白质分类水平和分 子水平分析，肌肉蛋白质呈现随 T-2 毒素暴露剂量增大而递减的趋势，这表明 T-2 毒 素是导致凡纳滨对虾肌肉品质下降的主要原因。本研究结果为 T-2 毒素诱导凡纳滨对 I II II 虾肌肉品质变化提供了具体参数及理论基础，为今后凡纳滨对虾产品质量安全绿色控 制提供科学依据。 关键词：T-2 毒素，凡纳滨对虾，肌肉，蛋白质，蛋白质组学 The change rules on muscle protein of Litopenaeus vannamei induced T-2 toxin Abstract Feeds were seriously polluted by T-2 toxin. T-2 toxin can inhibit the synthesis of DNA and RNA, and that inhibit the synthesis of protein by interrupt translation to start. With the process of T-2 toxin accumulation in the shrimp, muscle quality of shrimp changed. The object of research is Litopenaeus vannamei. The feeds has been artificial contamination of T-2 toxin, which was different set of exposure dose(0、1.2、2.4、4.8、12.2 mg/kg·feed). Shrimp mu