TIF1 γ减低肾小管上皮细胞对TGFβ抑制增殖效应敏感性的研究-肾脏内科专业论文.docxVIP

独创性声明 本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行研究工作及取得 研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何 其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和 集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一 切法律后果。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和 借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本论文属于 保密□，在 年解密后适用本授权书。 不保密□。 （请在以上方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 指导教师签名： 日期： 年 月 日 目 录 HYPERLINK \l _bookmark0 摘要 - 1 - 前言 - 1 - HYPERLINK \l _bookmark1 材料与试剂 - 7 - HYPERLINK \l _bookmark2 1、细胞 - 7 - HYPERLINK \l _bookmark3 2、材料 - 7 - HYPERLINK \l _bookmark4 3、实验仪器: - 7 - HYPERLINK \l _bookmark5 4、常用试剂的配制 - 8 - HYPERLINK \l _bookmark6 试验方法 - 10 - HYPERLINK \l _bookmark7 1、细胞复苏 - 10 - HYPERLINK \l _bookmark8 2、细胞传代 - 10 - HYPERLINK \l _bookmark9 3、细胞冻存 - 10 - HYPERLINK \l _bookmark10 4、细胞培养，预感染 - 10 - HYPERLINK \l _bookmark11 5、感染，筛选，挑克隆 - 11 - HYPERLINK \l _bookmark12 6、实验分组 - 11 - HYPERLINK \l _bookmark13 7、总蛋白提取 - 11 - HYPERLINK \l _bookmark14 8、western blot 检测 - 12 - HYPERLINK \l _bookmark15 9、加入外源性的 TGF-β 和/或 TGF-β 受体激酶抑制剂 - 14 - HYPERLINK \l _bookmark16 10、MTT 细胞增殖活性实验 - 15 - HYPERLINK \l _bookmark17 11、统计学方法 - 15 - 结果 -16- 结论 - HYPERLINK \l _bookmark7 21- 讨论 - HYPERLINK \l _bookmark7 21- HYPERLINK \l _bookmark18 参考文献 - 24 - HYPERLINK \l _bookmark19 致谢 - 26 - 华 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 - - PAGE 10 - 摘 要 目的 利用 RNA 干扰技术，封闭转录中介因子 1-γ( transcriptional intermediary factor 1γ， TIF1-γ)在肾小管上皮细胞（HKC）中的表达，外源性的加入 TGF-β 或 / 及 TGF-β 受 体 酶 抑 制 剂 (SB431542) ， 探讨 TIF1-γ 在 转 化 生 长 因 子 β( transforming growth factor-β，TGF-β )诱导的肾纤维化中的作用。 方法 构建能表达针对 TIF1-γ的小干扰 RNA(siRNA)的慢病毒载体，以及表达不 针对任何已知 mRNA 的 siRNA 的阴性对照载体，分别感染人肾小管上皮细胞株 (HKC)，得到 TIF1-γ表达受抑制的 HKC- siTIF1-γ和 TIF1-γ表达未受影响的 HKC-siControl。将培养的细胞分为 3 组：正常 HKC 组，HKC-siTIF1-γ组及 HKC-siControl 组，然后加入外源性的 TGF-β 或/及 SB431542，72h 后，分别采 用四唑盐（MTT）比色法实验和 western blot 检测，并分析 TIF1-γ在 TGF-β 抑 制肾小管上皮细胞增殖效应中的作用。 结果 没有加入 TGF-β 时，三组细胞生长活力差异不大，当只加入 TGF-β，三 组细胞生长活力均受到明显抑制，同时加入