Wip1介导的自噬调控及抗菌免疫机制研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

杭州师范大学硕士学位论文 杭州师范大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 The research of Wip1-mediate autophagy regulate antibacterial immunity Author’s signature: Supervisor’ s signature: External Reviewers: (姓名\职称\单位,下同) (隐名评阅学位论文省略) Examining Committee Chairperson: (姓名\职称\单位) Examining Committee Members: Date of oral defence： 杭州师范大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或 撰写过的研究成果，也不包含为获得 杭州师范大学 或其他教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 杭州师范大学 有权保留并向国家有关部门或 机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权 杭州师范大 学 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 （保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 致谢 本论文在史丽云导师的悉心指导下完成的。导师渊博的专业知识、严谨的治学 态度，精益求精的工作作风，诲人不倦的高尚师德，严于律己、宽以待人的崇高风 范，朴实无法、平易近人的人格魅力对本人影响深远。不仅使本人树立了远大的学 习目标、掌握了基本的研究方法，还使本人明白了许多为人处事的道理。本次论文 从选题到完成，每一步都是在导师的悉心指导下完成的，倾注了导师大量的心血。 在此，谨向导师表示崇高的敬意和衷心的感谢!在写论文的过程中，遇到了很多的 问题，在老师的耐心指导下，问题都得以解决。所以在此，再次对老师道一声：老 师，谢谢您! 时光匆匆如流水，转眼便是毕业时节，春梦秋云，聚散真容易。离校日期已日 趋渐进，毕业论文的完成也随之进入了尾声。从开始进入课题到论文的顺利完成， 一直都离不开老师、同学、朋友给我热情的帮助，在这里请接受我诚挚的谢意!在 此我向我们实验室的所有老师表示衷心的感谢，谢谢你们三年的辛勤栽培，谢谢你 们在教学的同时更多的是传授我们做人的道理，谢谢三年里面你们孜孜不倦的教 诲! 三年寒窗，所收获的不仅仅是愈加丰厚的知识，更重要的是在阅读、实践中所 培养的思维方式、表达能力和广阔视野。很庆幸这三年来我遇到了如此多的良师益 友，无论在学习上、生活上，还是工作上，都给予了我无私的帮助和热心的照顾， 让我在一个充满温馨的环境中度过三年的大学生活。感恩之情难以用言语量度，谨 以最朴实的话语致以最崇高的敬意。 最后要感谢的是我的父母，他们不仅培养了我对中国传统文化的浓厚的兴趣， 让我在漫长的人生旅途中使心灵有了虔敬的归依，而且也为我能够顺利的完成毕业 论文提供了巨大的支持与帮助。在未来的日子里，我会更加努力的学习和工作。 摘要 目的： 通过体内外实验研究 Wip1 对宿主抗菌免疫的影响，并阐明其内在调控机制。 方法： 1、构建小鼠气管灌注肺炎模型研究 Wip1 对小鼠抗菌作用的影响，并用 ELISA 检 测 BALF 中炎症因子的表达。 2、爬片和菌落涂板计数法检测 Wip1 对细胞抗菌能力的调控作用。用 ELISA 检测 细胞上清炎症因子 IL-1β、IL-6、TNF-α表达情况。Western Blot 检测 Wip1 对 NF-κB 以及 p38MAPΚ信号通路的调控作用。 3、构建 GFP-LC3 质粒，转染小鼠腹腔巨噬细胞，然后加 S.aureus 刺激，最后用 Confocal 观察腹腔巨噬细胞自噬情况；通过电镜直接观察细胞自噬体以及自噬溶酶 体；Western Blot 检测 LC3 - II/LC3 – I 比率的变化来探究 Wip1 对自噬的影响。 4、腹腔巨噬细胞用探针标记，流式细胞术检测 Wip1 对 ROS、mROS 的表达的调 控。同时用 Western Blot 和 Confocal 检测 Mito-tempo 对自噬的影响。 5、先用 ROS 抑制剂、自噬激动剂对小鼠进行气管灌注的预处理，然后气管灌注 S.aureus，最后菌落涂板计数以及 ELISA 检测自噬对宿主抗菌免疫