SOX9基因真核表达载体转染诱导间充质干细胞分化为类髓核细胞的分析-外科学(骨外)专业论文.docxVIP

第四 第四军医大学硕士学位论文 - - 缩略语表 缩略词 英文全称 中文全称 ADAMTS  A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin-like motifs 带有血小板凝血酶敏感 蛋白样模体的解整连蛋 白金属蛋白酶 AF BMP Anulus fibrosus Bone morphogenetic protein 纤维环 骨形态发生蛋白 CDMP CILP Cartilage-derived morphogenetic protein Cartilage intermediate layer protein 软骨源形态发生蛋白 软骨中间层蛋白 CK CS Cytokines Chondroitin sulfate 细胞因子 硫酸软骨素 ECM Extracellular matrix 细胞外基质 EGF FGF Epidermal growth factor Fibroblast growth factor 表皮生长因子 成纤维细胞生长因子 FSU GDF Functional spinal unit Growth differention factor 脊柱功能单位 生长分化因子 IDD IGF Intervertebral disk degeneration Insulin-like growth factor 椎间盘退行性变 胰岛素样生长因子 IL Interleukin 白细胞介素 IVD Intervertebral disk 椎间盘 KS LMP Keratan sulfate LIM mineralization protein 硫酸角质素 LIM 矿化蛋白 MMPs Matrix metalloproteinases 基质金属蛋白酶 MSCs NP Mesenchymal stem cells Nucleus pulposus 间充质干细胞 髓核 OP PG Osteogenic protein Preteoglycan 成骨蛋白 蛋白聚糖 PGE2 Prostaglandin E2 前列腺素 E2 SP SSEA Serine protease Stage-specific embryonic antigens 丝氨酸蛋白酶 特异性胚胎抗原 TGF-β Transforming growth factor beta 转化生长因子-β TIMPs Tissue inhibitor of metalloproteinase 金属蛋白酶组织抑制因 子 TNF-α Tumor necrosis factor-α 肿瘤坏死因子-α SOX9 基因真核表达载体转染诱导间充质干细胞分 化为类髓核细胞的研究 硕士研究 生：张琦 导 师：钱济先 教授 辅 导 教 师：裘秀春 副主任技师 第四军医大学唐都医院骨科，西安 710038 中文摘要 目的：探讨重组质粒 pcDNA3.1IE-SOX9Flag 体外转染诱导兔间充质干细胞 向椎间盘细胞分化的影响。 方法：构建真核表达载体 pcDNA3.1IE-SOX9Flag。取一月龄新西兰大白兔 骨髓分离培养间充质干细胞，体外诱导间充质干细胞向成骨细胞分化并鉴 定；流式细胞仪检测细胞表面标志物；将第 3 代 MSCs 随机分为转染组和 对照组，将重组质粒转染间充质干细胞，经 G418 筛选 2w 后，采用 RT-PCR 检测 SOX9 和Ⅱ型胶原的 mRNA 的表达，Western-blot 检测 SOX9 蛋白的表 达，免疫组化染色观察Ⅱ型胶原的表达。 结果：成功构建了 SOX9 基因的真核表达载体。间充质干细胞成骨诱导 7d 后碱性磷酸酶染色可见细胞呈阳性；CD44 表达阳性，CD45 和 CD34 表达 阴性。将重组质粒转染兔间充质干细胞， 72h 后观察到转染效率为 34.32%±1.75%；转染 2 周后的间充质干细胞形态改变，呈多角形或椭圆形， 细胞体积增大，增殖速度减缓，与椎间盘髓核细胞特性类似。RT-PCR 鉴定 发现转染组细胞 SOX9 基因和Ⅱ型胶原的 mRNA 表达阳性，对照组为阴性。 Western-blot 检测发现转染组 SOX9 蛋白表达阳性，对照组未见表达。转染 组间充质干细胞的Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。 结论：SOX9 真核表达载体成功转染兔间充质干细胞，被转染的间充质干细 胞向类髓核细胞分化，为进一步研究应用细胞移植治疗椎间盘退行性变奠 定基础。 关键词：SOX9 间充质干细胞 转染 髓核细胞 椎间盘退行性变 Differentiation of mesenchymal stem cells into nucleus pulposus-like cel