Th2亚型淋巴细胞在肾纤维化进程中发挥重要作用-肾病内科专业论文.docxVIP

华 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 CKD chronic kidney diseas 慢性肾脏病 ESRD end-stage renal disease 终末期肾脏病 RIF renal interstitial fibrosis 肾间质纤维化 ECM extra-cellular matrix 细胞外基质 AngⅡ angiotensinⅡ 血管紧张素Ⅱ TGF-β1 CTGF transforming growth factor-β1 connective tissue growth f actor 转化生长因子 β1 结缔组织生长因子 SCID severe combined immune deficiency 严重联合免疫缺陷 EMT epithelial to mesenchymal transition 上皮细胞间充质转化 UUO unilateral ureteral obstruction 单侧输尿管梗阻 IFN-γ interferon -γ γ-干扰素 IL-2 interleukin-2 白细胞介素-2 TNF-β tumor necrosis factor -β 肿瘤坏死因子-β PBS phosphate buffer saline 磷酸盐缓冲液 FITC fluoresceine isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 α-SMA α-smooth muscle actin α-平滑肌激动蛋白 DAB Diaminobenzidine 二氨基联苯胺 Th2 亚型淋巴细胞在肾纤维化进程中发挥重要作用 华中科技大学同济医学院附属同济医院肾内科 硕士研究生 曾巧 硕士生导师 徐钢 教授 中文摘要 目的 研究 CD4+T 淋巴细胞的亚型特别是 Th2 亚型在肾间质纤维化进程中发挥的 作用，为防治肾间质纤维化提供新思路。 方法 选择野生型 BALB/c 小鼠和 BALB/c 裸鼠，采用单侧输尿管梗阻（UUO）的方 法建立小鼠肾纤维化模型。将野生型 BALB/c 小鼠进行 UUO 手术，以正常野生型 BALB/c 小鼠为对照，手术后 3 天、7 天、14 天处死小鼠并分别提取脾 CD4+T 淋 巴细胞并诱导分化，采用流式检测各亚型的 CD4+T 淋巴细胞。将 BALB/c 裸鼠 随机分为四组，A 组为假手术组，B 组为 PBS+UUO 手术组，C 组为 Th1 细胞免 疫重建+UUO 手术组，D 组为 Th2 细胞免疫重建+UUO 手术组。于术后 14 天处 死小鼠，取输尿管梗阻侧肾脏，用 HE、MASSON 染色以及免疫组化来比较各组 肾脏炎性细胞的浸润程度和纤维化程度，采用 qRT-PCR 检测肾脏 fibronectin, TGF-β，CollagenⅠ的 mRNA 的表达。使用 ELISA 和 qRT-PCR 检测 Th1、Th2 细胞免疫重建裸鼠脾脏 CD4+T 淋巴细胞的相关细胞因子和转录因子的表达。 结果 Th1 细胞在野生型 BALB/c 小鼠 UUO 术后第三天所占比例最多，随后逐天 减少，Th2 细胞所占比例在 UUO 术后逐天增加，在术后第 14 天所占比例最多。 Th2/Th1 的比值在 UUO 术后随着时间的增加而增加。Th17 和 Treg 细胞所占比 例在此过程中没有明显改变。BALB/c 裸鼠免疫重建+UUO 术后 14 天，Th2 细胞 免疫重建+UUO 手术组较 Th1 细胞免疫重建+UUO 手术组纤维化面积更大， α-SMA 和 vimentin 阳性面积更多，fibronectin、TGF-β 和 CollagenⅠ的 mRNA 的表达明显增加。源于 Th1 细胞免疫重建裸鼠的 CD 4+T 淋巴细胞较极化的 Th1 细胞分泌较多的 IL-4 和 IL-13 以及较少的 IFN-γ，表达 T-bet 降低，GATA-3 升高。 Th2 细胞免疫重建组无特殊改变。 结论 比较野生型 BALB/c 小鼠 UUO 术后各组 CD4+T 淋巴细的亚型的比例变化， 可以推测出 Th2 亚型在肾纤维化进程中的作用发挥重要作用。Th1、Th2 细胞免 疫重建 BALB/c 裸鼠并行 UUO 术后，Th2 细胞免疫重建组后出现较 Th1 细胞免 疫重建组更为严重的纤维化，且 Th1 细胞可能在体内分化为 Th2 样细胞，从而 进一步证明 Th2 亚型淋巴细胞在肾纤维化进程中的作用发挥重要作用。总之， Th2 细胞在 UUO 诱导的肾纤维化中发挥重要作用。抑制 CD4+T 淋巴细胞向 Th2 细胞分化，将可能成为治疗肾纤维化的新方法。 【关键词】Th