Wnt2信号通路在胰腺癌转移及侵袭中的作用-临床医学专业论文.docx

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期：2014 年 05 月 31 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 本论文属于 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 不保密 √ 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期：2014 年 05 月 31 日 导 师 签 名 ： 日期：2014 年 05 月 31 日 天津医科大学博士学位论文 天津医科大学博士学位论文 中文摘要 目的 观察 Wnt2 蛋白在胰腺癌组织中的表达状况及其对胰腺癌细胞增殖迁移侵袭 等生物学行为的影响；初步探讨 Wnt2 蛋白影响侵袭转移的途径；探讨 Wnt2 蛋 白在胰腺癌星形细胞对胰腺癌细胞影响过程中发挥的作用。 方法 1. 胰腺癌组织病理 Wnt2 蛋白免疫组化染色，分析 Wnt2 蛋白在胰腺癌肿瘤 组织与癌旁组织中表达的差异；并结合临床病理参数分析 Wnt2 与临床病理参数 之间的关系；对病例资料进行随访观察，根据不同 Wnt2 蛋白表达状况作生存分 析。 2.构建 Wnt2 过表达质粒和干扰 RNA、应用 Wnt2 重组蛋白，观察不同 Wnt2 蛋白表达水平的胰腺癌细胞株的生物学行为。 3. 利用荧光实时定量 PCR 技术和 Western Blot 方法检测 Wnt2 重组蛋白培 养及干扰与过表达 Wnt2 后胰腺癌细胞 EMT 关键基因的 mRNA 和蛋白水平的表 达； 4. 检测 Wnt2 蛋白在胰腺癌星形细胞及其上清中的表达情况，检测星形细胞 培养上清对胰腺癌细胞功能的影响。 结果 1. 通过对 86 例胰腺癌组织病理切片的 Wnt2 蛋白免疫组化染色发现，55 例 （63.5%）病理切片中胰腺癌细胞 Wnt2 蛋白表达阳性；77 例（89.5%）间质细 胞 Wnt2 表达阳性；Logistic 回归分析显示：胰腺癌间质细胞 Wnt2 蛋白表达与 生存时间及无病生存期（DFS）相关（P=0.002、P=0.007），生存分析显示免疫 组化间质细胞染色评分大于 10 分的患者生存期与评分小于 10 分的患者相比有 显著性差异（P=0.019）。 2. 生物学行为观察结果显示：与对照组相比，胰腺癌细胞株过表达组、应 用 Wnt2 重组蛋白组胰腺癌细胞增殖速度均加快（P0.05）；而干扰组的细胞增 殖速度受抑制（P0.05）；应用 Wnt2 重组蛋白组胰腺癌细胞迁移（P0.05）及 侵袭能力增强（P0.05）。 3. 胰腺癌细胞 EMT 关键基因的 mRNA 的表达结果：RT-PCR 结果显示 Wnt2 重组蛋白培养 CFPAC-1 和 PANC-1 细胞 6 小时后，Wnt2 重组蛋白培养组的 I Vimentin 基因相对表达量分别是对照组的 2.06 倍（P0.05）和 1.96 倍（P0.05）； E-cadherin 基因相对表达量分别是对照组的 0.47 倍（P0.05）及 0.33 倍（P0.05）； PANC-1 细胞干扰及过表达组 Vimentin、E-Cadherin 基因相对表达量与对照组之 间无显著性差异。胰腺癌细胞 EMT 关键基因的蛋白表达水平：Western Blot 结 果显示 CFPAC-1 和 PANC-1 细胞经 Wnt2 重组蛋白培养 6 小时后，Vimentin 蛋 白表达水平增加；E-cadherin 只在 Wnt2 重组蛋白培养的 CFPAC-1 细胞中表达水 平降低。PANC-1 细胞干扰 Wnt2 组，Vimentin 蛋白表达水平较对照组降低， E-cadherin 蛋白表达水平升高；PANC-1 细胞过表达 Wnt2 组， E-Cadherin、 Vimentin 蛋白表达水平均降低。4.激活的星形细胞及其培养液中可见 Wnt2 蛋白， 星形细胞培养液培养胰腺癌细胞增殖速度加快（P0.05）；细胞迁移（P0.05） 及侵袭能力增强（P0.05）；细胞核内 β-catenin 增多。 结论 1. Wnt2 蛋白在胰腺癌间质细胞表达阳性与预后相关；患者间质染色评分越 高，生存期越短。 2. PANC-1 和 CFPAC-1 胰腺