干露胁迫对刺参体壁非特异性免疫影响.docVIP

干露胁迫对刺参体壁非特异性免疫影响 　　摘要：研究了不同温度（4、8、12、16、20、24 ℃和温度突变）下干露对刺参体壁非特异性免疫的影响。结果表明，在温度20和24 ℃条件下干露24 h后，刺参全部死亡，其余处理组刺参成活率为100%。刺参体壁水解酶类和抗氧化指标对于不同温度下干露胁迫具有不同的响应：(1) 在本研究的温度范围内，刺参体壁酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）活性总体随温度升高而增高，随干露时间的延长而逐渐下降；(2)刺参体壁中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和总抗氧化（T-AOC）活性等抗氧化指标呈现随温度的升高先增强，再逐渐下降的趋势，以16 ℃为最高。对于干露胁迫时间的响应，抗氧化酶活性等则在低温时（4～16 ℃）呈现先升高，然后逐渐下降的趋势，在高温（20和24 ℃）干露胁迫下，则呈现持续下降的趋势。（3）而模拟干法运输的刺参非特异性免疫指标的响应，总体上与12～16 ℃下干露胁迫相当，而且4～24 h之内，其AKP、SOD活性和T-AOC和MDA数值基本保持稳定。本研究结果表明，刺参干法运输中保持适当的低温可有效降低刺参的胁迫反应，提高刺参运输的成活率。 　　关键词：刺参；温度；干露；非特异性免疫 　　 　　 　　一般来说，水生生物在其生活史中，主要生活在水体里。但是对于潮间带生物来说，可能会经常面临不同时间的离水环境条件，而多数情况下，这种干露一般很少对其生命活动造成较大伤害。然而，大部分水生生物一般不能直接利用空气中的氧气，这种短时间的干露条件对于其体温的维持和氧气的获得必然会产生很大影响。这样，在干露条件下，这些水生生物必须通过一系列机体生理生化活动的调整来适应环境的变化。 　　刺参(Apostichopus japonicus)，属于棘皮动物门(Echinodermata)、海参纲(Holothuroidea)，具有很高的营养保健和医用价值，是我国北方重要的增养殖种类之一。在养殖生产过程中，刺参经常会遭遇干露条件，主要有两种情况：一种是在春秋季节，一定的水温条件下，许多刺参会爬到池塘浅水处，经常因换水过程或池塘的渗漏而干露在空气中一段时间；另一种是在干法运输过程中，刺参苗种和成参也可能经历一段时间长短不一的干露过程。尽管国内外对于刺参的生理生态学已有很多研究，但对于干露状态下刺参的非特异性免疫能力的状况尚未见研究。 　　刺参缺乏抗体介导的免疫反应，主要以非特异性免疫来识别异己物质、抵御病原体的侵袭。在逆境胁迫下会产生大量的活性氧，进而导致机体生理机能的损伤和免疫机能的破坏［1］。为了及时消除病原感染和环境胁迫的影响，维持细胞的正常代谢，生物体经过长期进化形成了完善而复杂的酶类和非酶类抗氧化保护系统［2］。酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)是动物体内参与免疫防御等活动的两种重要水解酶［3］。超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）是抗氧化系统的关键酶［4］，可用来评判机体的非特异性免疫能力［5］。总抗氧化能力(T-AOC)是衡量机体抗氧化系统功能状况的综合性指标［6-8］。MDA则是细胞氧化代谢产物，其含量高低反应机体细胞受自由基攻击的程度［9-11］。 　　本研究以刺参幼参为实验材料，研究了不同温度条件下干露对其体壁水解酶系统和抗氧化酶系统相关指标的影响，旨在研究干露胁迫对刺参免疫能力的影响，探讨刺参对干露胁迫适应机制，以期丰富刺参的生理生态学特征，为刺参运输方法的完善提供参考。 　　1材料与方法 　　1.1实验材料来源与驯化 　　刺参购于青岛即墨田横镇泊子村海参养殖基地。刺参运回后在600 L玻璃钢水槽中驯化 20 d之后，选取体长、体重相近的健康刺参进行实验［平均体重为（50±5）g］。暂养过程中，水温控制在（17±0.5）℃，盐度 （30±1）‰，海水溶解氧大于7.0 mg/L，海水中氨的浓度低于0.25 mg/L。光照周期14L∶10D。养殖用水为沙滤自然海水，每天换水 1/2并保持连续充气。按刺参体重的10%投喂配合饲料。 　　温度驯化在光照培养箱中进行，以每天升高或降低1.5 ℃的速度调整到各需要温度，3 d后开展实验，驯化期间光照周期为14L∶10D，连续充气，每2 d换水1/2，所换水为相同温度的水。 　　1.2实验设计 　　研究设置了6个不同的干露温度，即4、8、12、16、20和24 ℃，每个处理各包含30头刺参，平均体重为（50±5）g。刺参放在带孔泡沫隔板上，于可控温的光照培养箱内进行实验，光照强度为（80±5）lx。同时另取17 ℃暂养的刺参30头，将其直接放到4 ℃的光照培养箱中，用于模拟刺参运输过程。 　　1.3取样和测定方法 　　1.3.1取样方法分别于干露后0、2 、4、8 、12 和24