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小麦高蛋白含量基因与部分优质基因聚合研究 　　摘要：利用分子标记辅助选择与传统育种相结合的方法，将来自美国的小麦高蛋白基因GPC-B1与抗白粉病基因Pm21，优质亚基1Dx5、1Dy10等优良基因聚合到同一植株。首先将携带高蛋白含量基因GPC-B1小麦分别与抗白粉病基因Pm21、优质亚基1Dx5、1Dy10小麦杂交得到F2，利用分子标记辅助选择对亲本及杂交后代进行筛选，结合小麦抗病性鉴定、小麦籽粒蛋白质含量测定等方法对结果做进一步鉴定。结果发现，F2群体中100个株系中有6株聚合了GPC-B1、Pm21、1Dx5、1Dy10 4种基因，11株聚合高蛋白基因GPC-B1和抗白粉病基因Pm21，8株聚合了GPC-B1和5+10亚基。本研究为培育具有高蛋白含量及多个优质基因的小麦优良品系提供了育种材料和理论依据。 　　关键词：小麦；优质；基因；聚合；高蛋白 　　中图分类号： S512.103文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）06-0050-03 　　收稿日期：2015-05-13 　　基金项目：贵州省省长基金 （编号：2005175）。 　　作者简介：胡云（1982―），女，贵州织金人，讲师，从事作物遗传育种研究。E-mail：705498263@。 　　通信作者：徐如宏，教授，硕士生导师，从事小麦遗传育种及分子标记研究，E-mail：xrhgz@163.com；程剑平，教授，博士生导师，从事野生麦类作物和我国西南岩溶地区石漠化综合治理研究，E-mail：chengjianping@。传统育种技术通常受环境条件和显隐性关系等因素的影响，存在效率低、选择时间长等缺点。分子标记辅助选择则可降低育种盲目性、缩短育种时间、提高选择效率[1-2]。在聚合育种方面，相关报道并不少见，如通过聚合育种获得了带有抗白粉病基因Pm2+Pm4a，Pm4a+Pm21的新品系[3-4]，以及具有优质亚基HNW-GS 1、14+15、5+10的聚合体[5-8]。但是，相关报道基本上是针对不同基因控制的同一表现性状，而本研究是利用传统育种和分子标记辅助选择相结合的方法，将高蛋白含量基因GPC-B1、抗白粉病基因Pm21以及优质亚基1Dx5和1Dy10等控制不同性状的优良基因进行杂交，选育出聚合有GPC-B1、Pm21、1Dx5和1Dy10等优质基因的植株，为小麦选育优良种质资源提供理论依据。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　本研究选用11个试验小麦材料，详见表1。 　　1.2方法 　　1.2.1DNA提取采用CTAB法[9]提取小麦亲本、杂交F1总DNA，以及100个F2抗病单株的DNA。待小麦长至3～4片叶时，取0.2 g新鲜幼嫩叶片放入研钵中，加入750 μL的提取缓冲液磨碎，缓冲液为50 mmol/L EDTA-Na2，100 mmol/L Tris-HCl，2% CTAB，100 mmol/L NaCl；倒入1.5 mL 离心管65 ℃下水浴1 h，其间上下颠倒2次；加入等体积的氯仿-异戊醇（24 ∶ 1），混匀10 min，18 ℃、13 000 r/min 冷冻离心机内离心10 min；取上清液放入1.5 mL 离心管中，加入750 μL异丙醇混匀10 min；去上清液，加入1 mL 70%乙醇清洗DNA，室温下放置5～10 min，7 500 r/min 离心5 min，去上清液、干燥。加入100 μL 0.1×TE混匀，37 ℃下水浴1 h，取2 μL总DNA，1%琼脂糖电泳检测其纯度和浓度。其余DNA在4 ℃条件下保存。 　　1.2.2小麦优质基因的分子标记辅助选择（1）小麦高蛋白基因的SSR分析。与高蛋白基因GPC-B1连锁的特异引物为Xuhw89[9]，其序列为：UHW89-BF：5′-TCTCCAAGAGGGGAGAGACA-3′，UHW89-R：5′-TTCCTCTACCCATGAATCTAGCA-3′。特异引物UHW89-BF、UHW89-R扩增多态性标记为SSR122。所有PCR反应都在Perkin-Thermocycle 480上进行，反应总体积为20 μL。SSR反应体系中含有10 mmol/L Tris-HCl（pH值8.8），50 mmol/L KCl；2 mmol/L MgCl2；100 μmol/L dNTP；0.5 μmol/L 特异引物；1U Taq DNA聚合酶（上述药品均购自上海生工生物工程技术服务有限公司）；50～100 ng模板DNA，加ddH2O至终体积 20 μL。加1滴矿物油覆盖后进行扩增。反应条件为94 ℃预变性 3 min；94 ℃ 1 min，60 ℃ 1 min，72℃ 2 min，循环40次；最后 72 ℃ 延伸5 min，4 ℃ 保存。