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广山药组织培养技术研究 　　摘要：以广山药块茎为外植体进行组织培养，研究了消毒剂、消毒浓度、消毒时间对外植体消毒的影响，在此基础上研究了不同激素配比、培养条件对外植体愈伤组织诱导、分化及生根的影响。试验结果表明，用0.1%HgCl2 12 min的消毒条件处理山药地下块茎的效果较好；8 mg/L 2，4-D+0.5 mg/L 6-BA和5 mg/L 2，4-D+0.4 mg/L 6-BA，诱导广山药块茎愈伤组织的效果较好；采用1/2 MS+1 mg/L NAA+1 mg/L IBA的培养基对于广山药再生苗的生根效果最好，主根明显，出现更多的不定根和毛状根；添加1 g/L活性炭对于广山药块茎褐化的防治效果明显；黑暗培养能更好地诱导愈伤组织。 　　关键词：广山药；组织培养；愈伤组织；激素；消毒 　　中图分类号： S632.104+.3文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）02-0076-05 　　收稿日期：2015-03-20 　　基金项目：韩山师范学院博士科研启动项目（编号：Q。 　　作者简介：张振霞（1975―），女，博士，副教授，从事植物生物技术研究。E-mail：zhangzhenxia2006@。 　　通信作者：郑玉忠，博士，副研究员，从事中药学工作。E-mail：zhengyuzhong@。 山药是薯蓣 （Dioscorea opposita Thunb.） 的块茎，早在宋代广山药就是中药山药的一个品种，在中医上属于补益类中药，具有健脾止泻、补肺益肾等功能；同时也是南方各地的传统保健菜肴，营养丰富[1-2]。 山药通常利用块茎育苗或零余子播种等方式进行繁殖。这种传统的繁殖方式有着一定的弊病，主要是因为多数薯蓣科种类的细胞核内染色体数目较多，容易发生变异，出现性状分离，引起品种品质的退化[3]。另外，薯蓣科植物自身为了生存下来，会尽量多保留对外界环境适应能力强的性状，例如零余子的增多，块茎变小，品质变差，须根增多等[4]。此外，长期的无性繁殖会不断积累病毒，使其生产力明显下降[5-6]。目前对于山药的培养研究多为怀山药，而对广山药的组织培养少见报道。本研究利用植物生物技术中组织培养的方法对广山药进行快速无性繁殖，不仅可以保持其优良性状，在短期内生产出大量整齐、均匀的健壮种苗，解决繁殖系数低、块茎带病毒等问题，从而满足市场的大量要求。 　　1材料与方法 　　1.1材料来源 　　材料是购自广东省汕头市潮阳区的广山药块茎，并种植于花盆中待其长出植株，选取其幼嫩叶片和块茎作为试验材料。 　　以MS、NB为基本培养基，附加30 g/L蔗糖，7 g/L琼脂，pH值5.8，不同浓度2，4-D、NAA、6-BA、KT、IBA等激素。所有培养基均在121 ℃条件下高压灭菌15 min。 　　培养室温度（25±1） ℃，空气相对湿度50%～60%，光照时间每天12 h，光照度1 000～1 500 lx 。 　　1.2方法与步骤 　　1.2.1广山药块茎外植体的消毒选取新鲜广山药块茎，用自来水清洗干净后，放在蒸馏水中浸泡30 min，用蒸馏水清洗干净，70%乙醇消毒10 s，再按不同的方式进行消毒处理（表1），加入消毒剂之后再加入2滴吐温，恒温摇床100 r/min振荡灭菌，最后用无菌水清洗5次。用无菌滤纸吸干水分后将块茎切成1 cm大小、厚度0.3 cm的块状接种到MS培养基中，观察其生长状态并记录。 　　1.2.2广山药块茎愈伤组织诱导培养基不同基本培养基对愈伤组织的诱导有着不同的影响，本试验设置MS、1/2MS、NB母液培养基对广山药块茎愈伤组织的诱导。以消毒后的广山药块茎作为试验外植体，均切1 cm大小、厚度0.3 cm的块状，接种至含5 mg/L 2，4-D+0.5 mg/L 6-BA的MS、1/2MS、NB的培养基上，观察并记录基本培养基成分对广山药愈伤组织诱导的差异。 　　取消毒后的广山药块茎接种到MS基本培养基上，其中不同的生长激素分别为1 mg/L NAA+1 mg/L 6-BA、1 mg/L 2，4-D+1 mg/L 6-BA、1 mg/L NAA+1 mg/L IBA、1 mg/L 2，4-D+1 mg/L IBA，观察记录广山药愈伤组织的生长状况，比较哪种激素条件更适合诱导广山药块茎愈伤组织的诱导。 　　将广山药的无菌块茎接种在MS+0.5 mg/L 6-BA，设置2，4-D浓度分别为1、2、4、8、10 mg/L等5个不同浓度。通过观察记录，分析不同的2，4-D浓度对广山药块茎愈伤组织生长的影响。 　　广山药块茎均切小块，接种在MS+5 mg/L 2，4-D，其中6-BA浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mg/L等5个不同处