中药复方干预aml白血病干细胞nf-κb及flt3蛋白表达的分析-analysis of chinese herbal compound intervention on nf - κ b and flt 3 protein expression in aml leukemia stem cells.docxVIP

（三）中药溯源 25 六、实验结果分析 27 结 论 29 参考文献 30 综 述 36 致 谢 44 PAGE PAGE 10 引 言 急性白血病是目前严重危害人类健康的一种恶性肿瘤，其中急性髓系白血病 （AML）是成人急性白血病的最常见类型。如何提高该疾病的诊断治疗效果，成为世 界各国关注的焦点。近年来骨髓细胞形态学、细胞遗传学、分子生物学和免疫学（MICM） 相结合的方法，大大提高了该病的诊断和治疗水平。 目前，联合化疗已被公认为治疗该病最有效的方法之一。随着新型化疗药物和方 案的出现、支持治疗的加强、造血干细胞移植的广泛应用，AML 的治疗已经取得了较 好的缓解率。但同时也带来了不可忽视的负效应，如病毒及霉菌感染、花费较高、移 植后排斥反应、免疫力严重下降等。而且 AML 的复发并不能得到理想控制。 中医将急性白血病归于“急劳”、“热劳”、“血证”等范畴。老一代中医药专家们 就白血病的治疗做了积极的尝试，并且积累了丰富的经验。他们通过实验与临床研究， 发现中医药有以下作用：（1）中药可减轻化疗过程中的毒副反应，表现为减轻化疗的 骨髓抑制、提高免疫力、减轻胃肠道反应；（2）预防复发，延长缓解期；（3）止血与 预防出血、升高白细胞；（4）抑制白血病细胞增殖、诱导白血病细胞凋亡、杀伤白血 病细胞。 近年来 FLT3 和 NF-κB 与白血病的相关研究成为热点。FLT3 基因（FMS 样酪氨酸 激酶 3）是Ⅲ型酪氨酸激酶家族成员的原癌基因，FLT3 基因突变是 AML 最常见的基因 突变，主要包括内部串联重复突变（ITD）和点突变。现认为 FLT3 基因突变的阳性表 达可作为早期判断预后的指标，也可用于急性髓系白血病缓解后微小残留病的检测 [1] 。 NF-κB/Rel 蛋白家族是一类参与炎症、免疫、应激、细胞生长及癌症发生等诸 多生物学过程中基因调节的重要转录因子，在细胞信号转导中起着重要作用。目前 NF-κB 与白血病的相关研究成为热点。 中医药对于白血病的治疗具有重要作用。本研究运用免疫印迹法观察中药复方干 预急性髓系白血病细胞中 FLT3 和 NF-κB 蛋白表达的变化，以探讨中药在白血病治疗 中的作用。 临床研究 一、病例选择 本实验研究对象选自 2007年9 月至 2008 年 12 月期间于山东中医药大学附属医 院血液科、山东大学齐鲁医院血液科收治的住院及门诊的经骨髓象、细胞遗传学确诊 的初治或复发急性髓系血液病（M0、M1、M2、M4、M5）患者。共计 45 例。 排除标准：精神病患者，合并严重心、肝、脑、肾疾病以及其他造血系统疾病者， 怀孕及哺乳期妇女不予选择。 二、诊断标准 按照 FAB 分型中关于急性非淋巴细胞白血病的分类： M0（急性髓细胞白血病微小分化型） 原始细胞＞30%，在光镜下类似 L2 型细 胞。核仁明显。胞浆透明，嗜碱性，无嗜天青颗粒及 Auer 小体。髓过氧化物酶（MPO） 及苏丹黑 B 阳性＜3%。在电镜下，MPO 阳性，CD33 或 CD13 等髓系标志可呈阳性。 淋巴系抗原通常为阴性，血小板抗原阴性。 M1（急性粒细胞白血病未分化型） 原粒细胞（I 型+II 型）占骨髓非红系细胞的 90%以上，至少 3%细胞为过氧化物酶染色阳性。 M2（急性粒细胞白血病部分分化型）原粒细胞（I 型+II 型）占骨髓非红系细胞 的 30%～89%，单核细胞＜20%，其他粒细胞＞10%。M2 的染色体有 t（8；21）易 位，可查到 AML1/ETO 融合基因。 M3（急性早幼粒细胞白血病）骨髓中以多颗粒的早幼粒细胞为主，此类细胞在 非红系细胞中≥30%。可查到染色体 t（15；17）易位和 PML/RARα融合基因。 M4（急性粒-单核细胞白血病）骨髓中原始细胞占非红系细胞的 30%以上，各阶 段粒细胞占 30%～80%，各阶段单核细胞＞20%。CD14 阳性。M4Eo：除 M4 各特点 外，嗜酸性粒细胞在非红系细胞中≥5%。可查到 inv/del(16)。 M5（急性单核细胞白血病）骨髓非红系细胞中原单核、幼单核≥30%。如果原 单核细胞（I 型+II 型）≥80%为 M5a，＜80%为 M5b。CD14 阳性。 M6（急性红白血病，EL）骨髓中幼红细胞≥50%，非红系细胞中原始细胞（I 型+II 型）≥30%。 M7（急性巨核细胞白血病）骨髓中原始巨核细胞≥30%。CD41、CD61、CD42 阳性。 说明：原始细胞胞浆中无颗粒为 I 型，出现少数颗粒为 II 型。 三、临床调查 （一）一般资料统计 统计病例的一般资料，包括性别、年龄、住址、联系方式。 （二）实验室数据收集 统计患者初诊或复发时 AML 分型、外周血白细胞计数及骨髓原始细胞数。 实验研究 一、主要试剂及耗材 无