层析法提取和分离菠菜叶绿体中色素实验研究.docVIP

层析法提取和分离菠菜叶绿体中色素实验研究 　　摘要 高中化学新课程设置了层析实验，具体体现在各种版本、多个模块的化学教科书中。但是在实践层面不少教师对层析实验有畏难情绪。为了解决实践的困惑，选取了典型实验“层析法提取和分离菠菜叶绿体中的色素”进行了系统的实验研究，比较了几种方法的效果，对某些实验操作和实验试剂作了一定的改进。 　　关键词 层析法 菠菜 叶绿体 层析分离 实验化学 　　 　　在《普通高中化学课程标准（实验）》之“实验化学”的“活动与探究建议”中，提出了“食用色素的提取和层析分离”的建议［1］。由此，各种版本的普通高中课程标准实验教科书中都编排了有关层析法实验的内容。人教版 《有机化学基础》在第19页“科学视野”栏目中介绍了色谱法，“实践活动”栏目则是“用粉笔分离菠菜叶中的色素”［2］ ;人教版《实验化学》中编排了“纸上层析分离甲基橙和酚酞”，以及拓展实验“用粉笔对菠菜中的色素进行柱层析分离”［3］;苏教版《化学1》在“物质的分离与提纯”中以“拓展视野”的栏目介绍了层析法［4］； 苏教版《化学与生活》中编排了“信息提示”栏目介绍纸层析法，“活动与探究”栏目则是“用纸层析法分析色素”［5］；苏教版《实验化学》“课题二――用纸层析法分离铁离子和铜离子”，拓展课题是“菠菜的叶绿体中色素的提取和分离”、“用粉笔进行层析分离”［6］。 　　由此可见，不同版本、多个模块的化学教科书中都有层析实验的内容，特别值得关注的是，都不约而同地选择了菠菜的层析实验。但是，据笔者的了解，不少化学教师遇到有关层析实验只是在课堂上口头介绍而不做实验，学生更是没有亲自动手做层析实验的机会。究其原因，有的教师反映层析实验操作繁琐，有的教师反映层析实验现象不明显，总之是存在着畏难情绪。鉴于此，笔者进行了有关菠菜的层析实验的研究，分别用纸上层析法（条形滤纸法、圆形滤纸法）、柱层析法和薄层层析法进行了相关实验，分析、比较几种层析法的实验效果。 　　 　　1 实验原理 　　 　　叶绿体中的色素是植物吸收太阳能进行光合作用的主要物质。菠菜的叶绿体中含有胡萝卜素（橙黄色）、叶黄素（黄色）、叶绿素a（蓝绿色）、叶绿素b（黄绿色）等色素［7］。这4种色素都能溶于有机溶剂，如乙醇、乙醚、丙酮等，因此可利用这一特性用有机溶剂来提取叶绿体中的色素，并用特定的有机溶剂作展开剂来分离叶绿体中的色素。因为各种色素在展开剂中的溶解度不同――溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢。这样，几分钟后，色素就会随着层析液在滤纸上的扩散而分离开。 　　 　　2 试剂与仪器 　　 　　试剂：无水乙醇、95％乙醇、石油醚、丙酮、苯、氯仿、石英砂、碳酸钙（粉末）、氯化钠、菠菜及苋菜的新鲜叶片、薄层层析用硅胶、层析用滤纸、圆形定性滤纸（直径11 cm）。 　　仪器：烧杯、量筒、试管、橡皮塞、培养皿、滴管、漏斗、研钵、玻棒、载玻片、天平、铁架台及附件、剪刀、点样毛细管。 　　其他材料：粉笔、大头针、脱脂棉、棉线。 　　 　　3 实验步骤 　　 　　3.1 叶绿体色素的提取 　　（1）事先选取呈深绿色或墨绿色的菠菜，洗净后放置1~2天，阴干或风干。称取5 g，去中脉剪碎，置于研钵。 　　（2）研钵中加入少量（约小半药匙）石英砂（SiO2）和CaCO3 粉以及0.5 g NaCl、5~8 mL无水乙醇，研磨至糊状，再加8~10 mL无水乙醇，继续研磨至溶液呈墨绿色，再用漏斗配以脱脂棉进行过滤于试管中，过滤时可用研钵棒在脱脂棉上方轻压以使滤液顺利滴下。提取液应避光保存，因提取量较大，可用于其他相关实验。 　　（3）若事先没有将菠菜阴干或风干，则可将新鲜菠菜叶去中脉后于80℃下烘干［8］，约需30分钟，取出将其粉碎，置于小烧杯中用无水乙醇浸泡，并不断用玻璃棒搅动，待溶液呈墨绿色后以同样方法滤出提取液备用。 　　3.2 叶绿体色素的分离 　　3.2.1 纸层析法（条形滤纸法） 　　（1）准备滤纸：将层析用滤纸顺纸纹方向裁成长15 cm、宽1.5 cm的长方形，在距离一端2 cm处用铅笔画一条细的横线，并剪去这一端的两角（剪角时最好使其与端线呈70°~80°角）［9］。 　　（2）配制展开剂：石油醚、丙酮、苯的混合液（石油醚∶丙酮∶苯=20∶2∶1）。用大试管作层析容器，配上一合适的橡皮塞，并在橡皮塞上插入一端已弯成小钩子的大头针以便将滤纸条挂在其上。将展开剂转移至大试管时注意不要使液体沾在试管壁上，亦可使用滴管来转移。 　　（3）点样：用点样毛细管吸取少量提取液，沿铅笔线均匀地画出一条细线。待提取液干后，再画??3~5次，晾干。细线要画得细、齐、直。 　　（4）展开：将滤纸条挂在大头针上，将橡皮塞和点有试样的滤纸条慢慢伸入试管内，使纸条末端浸入