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循环水提取栀子黄色素研究 　　摘要：为了从栀子果实中分离纯化得到了品质较高的栀子黄色素，创新的采用了循环水提取与大孔树脂分离纯化相结合的方法。通过静态吸附与解吸附实验筛选树脂，并利用响应面实验设计对提取工艺条件进行优化。结果表明，HPD-100A 树脂对栀子黄色素选择性高，适宜纯化栀子黄色素。循环水提取栀子黄的较佳实验条件为：提取温度60oC，提取时间4.5 h，循环流速12 mL/min，此条件下，栀子黄色素提取率达到2.14%，栀子黄产品OD小于0.35，色价大于420。该方法工艺简单，成本低，栀子黄提取率较高，为栀子黄色素的工业生产提供参考。 　　关键词：栀子果实 栀子黄色素 循环水提取 分离纯化 　　中图分类号：T S202. 3 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2015）06-0000-00 　　1 引言 　　栀子黄色素是一种水溶性的类胡萝卜素，有较高的营养价值，极易被人体吸收，在体内可转化成维生素A，补充人体维生素[1]。研究表明，栀子黄色素还有抗癌和抗氧化的特性[2]。因此，栀子黄色素在食品、药品等行业有广泛应用，是一种着色力强、安全性好并具有营养保健作用的天然植物色素。 　　栀子果实中有效成分的提取方法有溶剂浸提法[3，4]、渗漉法[5]、超声提取法[6]、微波提取法[7]等。其中乙醇浸提法较其他方法更适于工业生产，但是生产工艺比较复杂，而且乙醇成本较高。以水代替乙醇，可以节省成本，但提取率偏低，且提取液中杂质含量高，纯化困难。本文采用循环水提取与大孔树脂分离纯化相结合的方法，得到纯度较高的栀子黄。此方法成本较低，工艺简单，为栀子黄色素工业生产提供参考。 　　2 材料与方法 　　2.1材料与试剂 　　栀子果实，购于浙江省遂昌县，于45 oC烘箱中烘干24 h，粉碎至约40目，避光阴凉处备用；西红花苷I标准品（≥98%），栀子苷标准品（≥98%），购于中国食品药品鉴定研究院；大孔吸附树脂：HPD-100、HPD-100A、AB-8、HPD-400、NKA、D101、X-5，均购于沧州宝恩化工有限公司。 　　2.2实验方法 　　2.2.1 栀子黄色素和栀子苷标准曲线 　　（1）栀子黄色素标准曲线的制备。精密称取西红花苷I标准品（≥98%）5.25 mg，去离子水稀释制备梯度溶液，高效液相色谱检测峰面积。色谱条件：色谱柱：Eclipse XDB-C18柱（4.6×150 mm）；流动相：乙腈/水（20： 80， v/v， 0-5 min； 50：50， v/v， 5-25 min）；流速：1.0 mL/min；色谱柱柱温：25 oC；检测波长：440 nm；进样量：10 uL。以峰面积为纵坐标，进样质量（μg）为横坐标绘制标准曲线。栀子黄色素标准曲线为：y=3732.7x+2.283（R2=0.9995）。 　　（2）栀子苷标准曲线的制备。精密称取栀子苷标准品（≥98%）9.33 mg，去离子水稀释制备梯度溶液，高效液相色谱检测峰面积。色谱条件：色谱柱：Edipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温：25 oC；流动相：乙腈-水（12：88）；波长：238nm；流速：6 mL/min；进样量：10 uL。以峰面积为纵坐标，进样液所含质量（ug）为横坐标绘制栀子苷的标准曲线。栀子苷标准曲线为：y=1454.0x-1.182（R?=1）。 　　2.2.2栀子黄色素提取液的制备 　　称取40 g栀子果实粉碎物，以料液比1：20的比例加入水，在50 oC下机械搅拌提取2 h。抽滤得到栀子黄色素水提液备用。 　　2.2.3大孔吸附树脂预处理 　　将七种不同型号的大孔吸附树脂（HPD-100、HPD-100A、HPD-400、D101、AB-8、NKA、X-5）置于无水乙醇中，浸泡24h，滤去乙醇并用水洗涤至无醇味，冷藏备用。 　　2.2.4静态吸附和解吸附 　　分别称取1.0 g处理过的HPD-100、HPD-100A、HPD-400、AB-8、D101、NKA、X-5树脂，置于100 mL锥形瓶中，每个锥形瓶中加入100 mL栀子黄水提液。将七个锥形瓶用保鲜膜密封后放入恒稳震荡仪中，设定温度20 oC，转速150 rpm，震荡24 h 后抽滤，检测滤液中栀子黄色素和栀子苷的浓度，计算吸附率，公式如下： 　　式中：C0为提取液中有效物质的质量浓度，mg/mL；C1为摇床震荡后水溶液中有效物质的质量浓度，mg/mL。 　　分别将锥形瓶中的大孔吸附树脂取出，滤去提取液后加入100 mL 80%乙醇水溶液，用保鲜膜密封后放入恒稳震荡仪中，设定温度为20 oC，转速150 rpm，震荡24 h 后抽滤，检测滤液中栀子黄色素和栀子苷的浓度，计算解吸附率