沉默fen1增强cddp对胃癌sgc-7901细胞化疗的敏感性-silent fen 1 enhances cddp sensitivity to chemotherapy of gastric cancer sgc - 7901 cells.docxVIP

重庆医科大学硕士研 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 FEN1 英文全称 Flap endonuclease1 中文全称 瓣状核酸内切酶 1 AP Ammonium persulphate 过硫酸铵 DMSO TBS Dimethylsulfoxide Tris-HCl buffered solution Tris 二甲基亚砜 Tris-HCl 缓冲盐 FBS siRNA fetal bovine serum Small interfering RNA 胎牛血清 小干扰 RNA WB Western blot 免疫印迹 NC CDDP Negative control Cisplatin 阴性对照 顺铂 FCM HRP Flow cytometer Horseradish peroxidase 流式细胞术 辣根过氧化物酶 1 沉默 FEN1 增强 CDDP 对胃癌 SGC-7901 细胞 化疗的敏感性 摘 要 背景：瓣状核酸内切酶 1（FEN1）在 DNA 复制和修复中起关键作用， 许多研究证实其表达水平与癌症的发展和预后相关。本课题组前期研 究发现 FEN1 的表达水平与胃癌患者的预后及发展相关；同时发现下调 FEN1，可抑制胃癌 SGC-7901 细胞的生长和促进细胞凋亡，意味着 FEN1 可能会成为治疗胃癌的潜在靶点。而且，已有研究表明 FEN1 的抑制剂 可增强 DNA 烷化剂化疗的敏感性。这些结果提示了 FEN1 可能会成为增 强 DNA 烷化剂等化疗药临床治疗的一个有效靶点。然而，关于 FEN1 与 CDDP 之间的具体关系，还缺乏更深层次的研究。本课题拟在前期工作 基础上，进一步研究 FEN1 是否可作为增强 CDDP 对胃癌 SGC-7901 细胞 化疗敏感性的靶点，为 FEN1 作为胃癌个性化、靶向性治疗的新靶点提 供实验依据和理论支持。 目的：探讨利用 RNA 干扰技术特异性沉默胃癌 SGC-7901 细胞的 FEN1 对 CDDP 化疗敏感性的影响。 方法： 1.以 CDDP 作为诱导剂诱导 FEN1 的表达，通过 Western-blot 验证 2 FEN1 的表达水平，探讨 CDDP 是否可诱导 FEN1 的表达上调。 2. 使 用 实验 前 期 成 功 构 建 的 特异 性 FEN1-siRNA 靶向 序 列 ， NC-siRNA 及未转染组（Untransfected 组）作为对照组，Western-blot 方法检测转染胃癌 SGC-7901 细胞后的 FEN1 蛋白表达以期检测抑制率。 3.MTT 法分别检测 FEN1-siRNA+CDDP 实验组、NC-siRNA+CDDP 及 Untransfected+CDDP 组对照组胃癌 SGC-7901 细胞的生长增殖活性。即 在不同的实验分组中分别予以不同浓度 CDDP 和 10μ M CDDP 予以不同 时间间隔处理。 4.利用流式细胞术（FCM）检测 FEN1-siRNA+CDDP 联合组、NC- siRNA+CDDP 处理组及 Untransfected+CDDP 处理组的胃癌 SGC-7901 细 胞株的细胞凋亡率变化；同时利用 Western Blot 方法检测各组 Bcl-2、 Bcl-xl 和 Bax 的蛋白表达水平变化。 结果： Western Blot 结果显示 FEN1 的蛋白表达水平随着 CDDP 的浓度 增加(0，10, 20, 30, 40, 50 μ M CDDP 处理 48 h)及时间延长(30 μ M CDDP 处理时间为 24 h, 48 h 和 72 h)而呈依赖性增加（P0.05）。 Western-blot 方法检测结果显示，试验组 FEN1-siRNA 组细胞中 的 FEN1 的蛋白表达明显低于 NC-siRNA 及 Untransfected 两个对照组 （P0.05）。 MTT 法结果显示 FEN1-siRNA+CDDP 联合组的胃癌 SGC-7901 细胞 株在不同的 CDDP 浓度(0, 2.5, 5, 10, 20, 30, 40 和 50 μM )和 10μM 3 CDDP 予以不同时间(24 h, 48 和 72 h)处理的条件下，其细胞生存率 均 明 显 低 于 NC-siRNA+CDDP 及 Untransfected+CDDP 两个 对 照 组 (P0.05)。 4.流式检测结果显示，FEN1-siRNA+CDDP 联合组的胃癌 SGC-7901 细胞的细胞凋亡率显著高于 NC-siRNA+CDDP 及 Untransfected+CDDP 两 个 对 照 组 （ P0.05 ）。 同 时 ,Western-blot 方 法 结 果 显