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彝药露水草中β―蜕皮激素提取工艺研究 　　摘要：目的采用纤维素酶法及澄清工艺提取彝药露水草中β-蜕皮激素。方法纤维素酶法：加入纤维素酶，从其影响因素pH值，酶加入量，酶解温度及酶解时间入手，采用L9（34）的正交试验设计，分析实验结果得出最优提取工艺流程；澄清工艺：加入不同类型及不同比例的澄清剂。结果pH值45，酶加入量9 mg，酶解温度40℃，酶解时间30 min；壳聚糖澄清剂及ZTC1+1-Ⅱ型澄清剂A：B（2：8）澄清效果最佳。结论该工艺提取过程简单、高效、节约成本，为改进生产企业从露水草中提取β-蜕皮激素的提取工艺提供参考依据。 　　关键词：β-蜕皮激素；提取；纤维素酶；澄清剂；峰面积；透光率；提取工艺 　　中图分类号：R2842文献标志码：B文章编号：1007-2349（2017）07-0070-04 　　露水草（Cyanotis arachnoides CBClarke）又名珍珠露水草，鸡冠参等，属鸭跖草科蓝耳草属多年生草本植物，其根可以入药，夏秋采集，洗净，鲜用或晒干。露水草有祛风活络，利湿消肿，退虚弱等功效。用于风湿性关节炎，腰腿痛，肾炎水肿，虚热不退；外用治湿疹，脚癣，刀伤。随着科学研究的进步，近年来对露水草有效成分的研究也越来越深入，露水草中含有的β-蜕皮激素被广泛用于养殖、保健、化妆品、医药行业[1]。 　　蜕皮激素作用于人体有促进胶原蛋白合成、抗心律不齐、抗疲劳；促进细胞生长、刺激真皮细胞分裂，排除体内的胆固醇；降血脂，抑制血糖上升；通经活络，除湿镇痛，等生理活性。是天然的抗癌制剂。露水草蜕皮激素自1976年问世以来，已研制不定期片剂、针剂、膏剂。民间用于风湿性关节炎，治疗不同症状的风湿及关节炎患者有较好疗效，其有效成分20-羟基蜕皮甾酮经临床研究证明具有直接降血糖作用，对II型糖尿病总有效率84%，对改善糖尿病患者“三多一少”症状尤为明显。 　　在运动保健品方面，蜕皮激素具有显著的通过增加氨基酸装配成蛋白链，从而刺激肌肉细胞质中蛋白质合成的能力，而且该能力回溯至蛋白质生长的转译和迁移过程。蜕皮激素不仅有益于健康而且安全，其有助于稳定在皮质醇伤害时的细胞，使能量合成步骤正常化（ATP和肌氨酸）和改善肝功能?亩?使有机体能迅速地适应环境和压力变化。其安全性很高，经超过50次的研究显示蜕皮激素没有副作用，没有与荷尔蒙的相互作用，毒性水平也极低。当1998年ICN生化实验室对其进行测试时，数据显示蜕皮激素要显示出毒性必须达到6400 mg/kg的超高剂量。而且，在包含测试睾固酮，皮质醇，胰岛素，促皮质素，生长激素和黄体生成激素的内分泌测试中，没有任何蜕皮激素对哺乳动物荷尔蒙系统作用的报道。 　　在蚕业养殖上，用于促使桑蚕龄期缩短，上簇整齐，促进吐丝结茧；蜕皮激素是水生甲壳类――虾、蟹类生长发育、脱壳变态所必须的物质，是“脱壳素”的主要原料；该品适用于虾、蟹等水产甲壳类及地憋虫的人工养殖，添加该品后可使虾、蟹顺利脱壳，促进虾、蟹类脱壳的一致性，有效避免个体间的互相残杀，显著提高养殖成活率和商品规格。 　　在化妆品上，一般使用的是经过特殊处理后的高纯度的蜕皮激素也叫“蜕皮甾酮”，呈纯白色结晶性粉末或无色的透明结晶体，成分单一，对皮肤无过敏反应，具有很强的渗透性，在液态状态下能快速被皮肤吸收；能增强细胞新陈代谢及活化的有效物质，具有良好的去角质、去斑增白作用，对面部黄褐斑、外伤性黑斑、雀斑、黑色素沉着等有很好的修复功效，另对粉刺亦有明显效果。 　　可见β-蜕皮激素药用价值极高，成为科学研究的一个热点，因此，从露水草中如何高效地提取β-蜕皮激素成为了研究的关键。 　　本实验为了探索从露水草中提取β-蜕皮激素的最佳工艺流程，试图采用纤维素酶法[2]及澄清工艺进行提取[3-6]。从影响酶解的因素：PH值、酶加入量、酶解时间及酶解温度入手，通过实验得出一个最优的提取工艺流程。 　　1材料和方法 　　11试验材料及试剂露水草干粉，β-蜕皮激素（北京坛墨质检科技有限公司 北京北化恒信生物技术有限公，纤维素酶（国药集团化学试剂有限公酶活力/（U/g150000）），ZTC1+1-Ⅱ型澄清剂A组分（北京正天成澄清技术有限公司），ZTC1+1-Ⅱ型澄清剂B组分（北京正天成澄清技术有限公司），壳聚糖，冰醋酸，醋酸钠，氢氧化钠试液，70%乙醇，纯化水，乙腈。 　　12仪器与设备电子天平（赛多利斯BSA224S-CW），电子天平（赛多利斯BP211D-OCE），三合一电极酸度计（ORION 3 STAR Thermo ELECTRON CORPORATION），超声波清洗仪（CPXS800H-C 心能信超声上海有限公司），高效液相色谱仪（安捷伦1260DAD），高速台式离