重组人神经型一氧化氮合酶催化阿霉素单电子还原的分析-analysis of doxorubicin single electron reduction catalyzed by recombinant human neurogenic nitric oxide synthase.docxVIP

摘 要 人 神经 型 一 氧 化氮合 酶 恤 可 以催 化 电子 从供 体 传递 给 醒 类 抗 肿 瘤 药 物 阿 霉 素 活 化 后 的 因 引 起严 重 的心 血 管毒 性 而 限 制其 临床 药 用 我 们 对 恤 催 化 的阿 霉 素 单 电子 还 原 作 用 机 制进 行 了研 究 我 们 成 功构 建 了 全 长 酶在 大 肠 杆 菌 中 的表 达 系 统 层 析 法 纯 化得 到 大 量 高纯 度 的 酶 对 其进 行 了性 质 鉴 定 发现用 于 表 达 细 胞 色 素 还 原酶 的原 核 表 达 系 同样 适 用 于 与 鼠 的 性 质 相 似 然 后 进 一 步用 全 长 酶 和 它 的还 原酶 结 构 域 结 合 结 构域 结 合 结 构域 在 有氧 条 件 下 对 进 行 了 催 化 反 应 观 察 和 研 究 了 反 应 过 程 中 的 吸 光 度 的 改 变 实 验 数 据 显 示 可 以催 化 有 氧 状 态 下 对 的 氧 化 作 用 钙 离子 钙 调 蛋 白 结 合 可 以促 进 对 的氧化 作用 无 论 有 无 黄 素 半醒 均 为 反 应 的 主 要 中 间产 物 不 论 是 半 醒 ’ 还 是 空 气 稳 定 半醒 均 不 能 与阿 霉 素 迅 速 反 应 这 些 实验 数据 说 明 在 存 在 的 条 件 下 单 电 子 受 体 主 要 从 处 接 受 电 子 双 电 子 还 原 半 醒 和 下 和 三 电 子 还 原 半 醒 用 ’和 ’邝 是 反 应 中 的 活 性 形 式 均 可 以迅 速 传 递 单 电子 给 电子 受 体 总 结 以 上 实 验 结 果 得 出 以 下 结 论 我 们 构 建 的 表 达 系 和 纯 化 方 法 适 用 于 表 达 在 酮 类药 物 的生 物转 化 过程 中起 着 重 要 的 作 用 扩 通过 促 进 分 子 间 电子 传 递 加 速 了 对 的 单 电子 还 原 作 用 关 键 词 人 类 神经 型 一 氧 化 氮合 酶 表 达 醒 单 电子 还 原 阿 霉素 黄 素 半 细 胞 色 素 还 原酶 如 腼 面 认飞 七 直 血 士 出 肋 土 出 翻 而 山 丽 闪 而 卜 直 加 一 犬办，  面 记 田泊 灿 一 一  月 叫 二 彻 石习 一 一 一 一 一 一 一 一 一 冲 一 一 一 而 ’ 如 一 ， 困 而 几 伽 即 五脚 材 材 印 而 如 龙 场 龙 场 赶 川 一 州 山 化 ， 而 而 冲 而 ， 怡州 比 ’ 洲甲 石甲哎 卜艾 石  扭 川月以间峭 奋翻目 卜翻叫 弓义心 义 匆 川储 消闪 咤几 州 即 卜 哪 鑫 刚 如旧 压 州卜 闪 砍 困 《洲堪 一 勿 冲 而 而 即 币 如 洲 「夯 「 甲 叮 。一入 、 ，刹以 。 。 一 日 一 叽 礴 ， 币 】 明 明 ， 而 币 叭 耐 俨唱 俨 唱 一 而 ， ” 而 币 币 币 一 囚 ， 币 币 ， 而 阎 ， 丫 卿 ， ， ， 仃 ， 而 叩 ， 咖 斤 ， 丫 丫 ，介 ， 、 面 刀 而 州 州 「决 自娜目 长 八 。公之今 。 三鼓 一送， 。。 「目曰子翻洲 心口目自‘ 「 「 么探 月 〔「 户 日 厂 〔 ， ‘ 「 ‘ 「 「 严 人沐 「八 攀连 〔 ‘ 「 ‘ 化 们 小 几 暇开 少︸、几 了二 了从丫 别翔 翻娜 暇目  价触，目 口 《 而 明 明 囚 肋 『 一 铃  铃 如 抑 忍 的 日 嘴门，  月石 阳钧 肠 区亘〕 卜 确 ，即 ” ， 冬一一 与翻 比 了 。从 。 从 仁 ， 的 加 匀 弓叨 姗 ，目 匆 ’ 一 而 山 飞 飞 囚 囚  囚 囚 囚 囚 油 油 而 加 而 而 ， 。 沛 的翻曰州门帕 口妞冲 阴翻神怕、 口口 句  坛吉 自 臼洲脚白 脚自， 睦 七 勿 ， ， 而 而 而 川 州匕 翻而 护托睡 抽山箱目 怕瀚 即 帅 邓 面 而 拓 叭 面 十 仇 一 十 仇 飞 面 而 而 而 ， 由 化 丽 而 几 北 ” 明 由 面 而 加 衔 卜 而 犷 犷 而 币 币 几 】 犷 由 土 洲 血 由 址 而 刀 ， ， 几 ， 卿 ， ， ， 五 五 俪 ， 闪 乃 ， 乃 从六逮 ， ， ， 、 、 韶 朗 卜 ， 月七 印 而 而 】 址 协 林 林 林 林 林 而 曲 曲 记 七 七 林 ，气乙  件，麦八‘，﹄‘，，，巧 ，， ’ 日 日 卫 珍 ， ， 从抢 乙肠 月 刀退红塑卫 州 刀℃ 工里工丛旦