猪肾小管发育及坏死后修复过程的分析-analysis of renal tubular development and repair process after necrosis in pigs.docxVIP

解放军医学院硕士学位论文 解放军医学院硕士学位论文 PAGE PAGE 10 作 者：沈珊珊 学科专业：内科学（肾病） 导 师：谢院生 猪肾小管发育及坏死后修复过程的研究 中文摘要 1、目的：⑴ 明确解剖和生理上与人非常接近的中国实验用小型猪肾脏发育过程 中肾小管的形态学变化和肾小管各节段的特异性标志物；⑵ 细胞极性是肾小管 上皮细胞发挥生理功能的结构基础，明确成体猪肾小管坏死后修复过程与胚胎猪 肾小管发育过程中细胞极性形成过程的一致性。 2、方法：⑴ 采用高碘酸-希夫（PAS）染色和免疫荧光染色技术，系统观察中 国实验用小型猪妊娠 28 天-112 天（E28d-E112d）和出生后 1 天、7 天、14 天、 21 天（P1d-批 21d），共 17 个不同时间点猪肾小管的发育及肾小管特异性标志物 雪莲花凝集素（LTL）、水通道蛋白 1（AQP1）、钙结合蛋白（Calbindin-D28k） 在肾小管不同节段的表达；⑵ 通过肌肉注射硫酸庆大霉素制作出生后 12 周雄性 中国实验用小型猪急性肾小管坏死后自然修复的动物模型，分别在注射庆大霉素 10 天后第 1 天、第 7 天和第 14 天取血并采集肾脏标本，另外采集妊娠 42 天猪 的胚胎肾脏标本；采用 PAS 染色观察成体猪肾小管坏死后修复再生过程与胚胎 猪肾小管发育过程中肾小管的形态学变化；以 Na+-K+-ATP 酶作为细胞极性的标 志物，PCNA 作为新生细胞的标志物，采用免疫荧光和免疫组织化学染色技术对 比观察成体猪肾小管坏死后修复再生过程与胚胎猪肾小管发育过程中细胞极性 形成的过程。 3、结果：⑴ 中国实验用小型猪 E28d 可见后肾间充质和输尿管芽，即后肾已经 开始发育；但这时还没有肾小管。E35d 可见不同节段的肾小管，即肾小管已开 始发育。从 E35d 到 P14d（E112d-E114d 仔猪出生），肾皮质均有生肾区存在， 即不断有新的肾单位发生；P21d 生肾区已消失，即不再有新的肾单位产生。⑵ ① LTL 在 E28d 表达在输尿管芽，E35d 开始在近端小管表达,以刷状缘表达最为明 显；表达由弱到强，由点状到线状。② AQP1 在 E28d 未见表达，E35d 开始表达； AQP1 表达在近端小管和髓袢，主要表达在细胞膜，尤其在管腔侧的表达更为明 显。③ Calbindin-D28k 在 E28d 表达在输尿管芽，E35d 开始表达在远端小管和集 合管；Calbindin-D28k 主要表达在细胞质，随着肾小管发育，表达逐渐增强。⑶ 在中国实验用小型猪肾小管发育的研究中，发现集合管来源于输尿管芽，发源于 输尿管芽的集合管从被膜下的生肾区一直延伸到肾髓质。⑷ 成体猪注射庆大霉 素 10 天后第 1 天，肾小管上皮细胞坏死、脱落，肾小管基底膜裸露，管腔内有 大量脱落的上皮细胞碎片；第 7 天，肾小管基底膜出现新再生的肾小管上皮细胞； 第 14 天，大多数肾小管结构恢复至接近正常。⑸ 成体猪注射庆大霉素 10 天后 第 1 天，裸露的肾小管基底膜没有 Na+-K+-ATP 酶和 PCNA 的表达；第 7 天，新 再生的肾小管上皮细胞 PCNA 阳性，有 Na+-K+-ATP 酶的表达，但此时 Na+-K+-ATP 酶没有明显的极性分布，胞膜和胞浆均有表达；第 14 天，PCNA 阳性细胞 Na+-K+-ATP 酶呈极性分布，主要表达在肾小管上皮细胞的侧基底膜。⑹ 胚胎猪 肾小管发育过程是从肾小管前体发育成为不成熟的肾小管，再发育成为成熟的肾 小管。⑺ 胚胎猪肾小管发育过程中，Na+-K+-ATP 酶的表达从没有极性到有极性 分布，即 Na+-K+-ATP 酶从肾小管上皮细胞的胞膜和胞浆均有表达到只局限在侧 基底膜表达，在这一过程中 PCNA 均为阳性。 4、结论：⑴ 中国实验用小型猪妊娠 28 天肾脏开始发育，妊娠 35 天可以见到不 同节段肾小管，P14d-P21d 生肾区消失，不再有新的肾单位形成。⑵ LTL、AQP1、 Calbindin-D28k 可以分别作为猪近端小管、髓袢、远端小管和集合管的标志物。 ⑶ 成体猪肾小管坏死后修复过程中细胞极性形成的过程与胚胎猪肾小管发育过 程中细胞极性形成的过程是一致的，提示猪肾小管坏死后修复再生的过程类似肾 小管胚胎发育的过程。 关键词：猪，肾小管发育，损伤与修复，细胞极性 Study on the development of the renal tubules and its repair process after necrosis in pigs Abstract Objective: ⑴ To clear the morphological changes of the renal