柚皮苷对动脉粥样硬化大鼠主动脉PPARδVCAM1mRNA表达影响.docVIP

柚皮苷对动脉粥样硬化大鼠主动脉PPARδVCAM1mRNA表达影响 　　【摘要】　目的：探讨黄酮类化合物柚皮苷对动脉粥样硬化（atherosclerosis，　AS）大鼠主动脉过氧化物酶体增殖物激活受体-δ（peroxisome　proliferator-activated　receptors　δ，　PPAR-δ）、内皮细胞黏附分子1（vascular　cell　adhesion　molecular-1，VCAM-1）表达水平的影响。方法：通过喂养高脂饲料造成动脉粥样硬化的大鼠模型。实验动物分为正常对照组，AS模型组和柚皮苷AS组。实验结束后测定血中甘油三脂、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白及极低密度脂蛋白的水平，应用RT-PCR法检测大鼠主动脉PPAR-δ、VCAM-1的基因表达。结果：柚皮苷AS组血中甘油三脂、总胆固醇、低密度脂蛋白及极低密度脂蛋白的水平比AS模型组明显降低，高密度脂蛋白水平明显升高（P0.01）；柚皮苷AS组主动脉PPAR-δ的基因表达高于模型组，而VCAM-1的基因表达则低于模型组　（P0.05）；结论：柚皮苷可降低AS大鼠的血脂水平，上调主动脉PPAR-δ的基因表达，下调VCAM-1的基因表达，可能为其抗AS的机制之一。 　　【关键词】　柚皮苷；　动脉粥样硬化；　过氧化物酶体增殖物激活受体-δ；　内皮细胞黏附分子-1 　　AS是目前心血管疾病主要的死亡原因，发病机制主要为损伤-反应学说。在长期高脂血症情况下，增高的脂蛋白对动脉内膜产生功能性的损伤，使得单核细胞黏附、迁移、吞噬，最终形成脂质条纹[1]。因此脂蛋白的代谢、细胞的黏附是其中两个重要的环节。 　　PPAR-δ作为过氧化物酶增殖体激活受体（PPAR），是一类基因转录因子，属于核激素受体超家族[2]。现阶段认为，PPAR-δ在脂肪代谢，改善胰岛素抵抗和抗血管炎症反应中起着重要作用[3]。 　　VCAM-1　是免疫球蛋白超基因家族，主要由血管内皮细胞表达，在高血脂刺激AS　形成过程中，能促进免疫细胞浸润，使单核细胞和淋巴细胞粘附于血管内皮[4]。 　　柚皮苷是一种双氢黄酮类化合物，在某些传统中药及水果中含量丰富，如枳实，骨碎补，柚、橘类果皮及汁等中。研究发现，柚皮苷具有非常广泛的药理作用，主要表现为抗炎、抗氧化及抗动脉粥样硬化[5-6]。 　　本实验拟在观察柚皮苷对AS大鼠主动脉PPAR-δ、VCAM-1基因表达的影响。 　　1　材料与方法 　　1.1　药品与试剂　柚皮苷由陕西慧科植物开发有限公司提供、胆酸淮北市创凯生化原料厂提供、胆固醇成都科龙化工试剂厂提供、丙基硫氧嘧啶苏州恒益医药原料有限公司提供、猪油来自市售板油炼制、羧甲基纤维素（CMC）上海化学试剂采购供应站提供、Trizol溶液、逆转录试剂盒及荧光定量PCR检测试剂盒由大连宝生物有限公司提供、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和总胆固醇测定试剂盒由浙江东瓯生物工程有限公司提供。 　　1.2　检测仪器　日立7170S全自动生化分析仪，ABI　PRISM　7000热循环仪。 　　1.3　动物　SPF　SD雄性大鼠共40只，体重（220±20）g　[四川省医学科学院四川省人民医院实验动物研究所提供，合格证号（SCXK川2006-14）]。实验由川北医学院药物研究所SPF级动物实验室完成。 　　1.4　方法 　　1.4.1　动物分组给药　动脉粥样硬化饲料配方，脂肪乳剂：猪油20%，胆固醇10%，胆酸钠2%，丙基硫氧嘧啶1%，吐温-80　20%，丙二醇30%加水至100%。动物分为3组，一组给普通饲料，另两组给予AS饲料，共12周，后改喂普通饲料。然后分别灌胃给药，普通饲料组及AS对照组（为0.5%CMC溶剂对照）、柚皮苷AS组（柚皮苷10　mg/100　g），给药容量为1　ml/100　g体重，每天1次，连续8周，药物均以0.5%CMC配制。 　　1.4.2　主动脉留取　实验结束后乙醚麻醉动物，剖开胸腹腔，腹主动脉取血，离心（3500　rpm）5　min取血清备用。取全主动脉，剥离外膜脂肪组织，用于提取RNA。 　　1.4.3　逆转录PCR　将大鼠主动脉标本研磨匀浆后，移入EP管，采用氯仿-酚法抽提RNA。随后RNA变性，逆转录合成cDNA。 　　1.4.4　荧光定量PCR检测　引物由英俊公司合成。PPAR-δ引物序列，上游引物：5’-GTT　CGC　CAA　GGT　GCT　CCA　G-3’；下游引物：5’-GCT　CAT　ATC　TGT　CTC　CGT　CTT　CTT-3’。VCAM-1引物序列，上游引物：5’-GGA　GACACT　GTA　ATT　ATC　TCC　TG-3’；下游引物：5’-TCC　TTT　CAT　GTT　GGC　TTT　TCT　TGC-3’。