栝楼桂枝汤对脑缺血再灌注大鼠肢体功能及GAP―43影响.docVIP

栝楼桂枝汤对脑缺血再灌注大鼠肢体功能及GAP―43影响 　　【摘要】目的：探讨栝楼桂枝汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后肢体运动功能以及生长相关蛋白-43的作用。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组和栝楼桂枝汤组各7只，线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型，栝楼桂枝汤组于造模后给予栝楼桂枝汤治疗，每日1次，连续14d。分别于造模后1d、3d、7d和14d采用改良神经功能缺损评分（mNSS）、平衡木平衡试验（BeamBalance）、足失误试验评价神经功能恢复状况；采用免疫荧光组织化学方法检测脑缺血周边区GAP-43的表达。结果：栝楼桂枝汤可显著降低脑缺血损伤大鼠的mNSS评分、降低BeamBalance评分，减小足失误比率（P005）。栝楼桂枝汤组GAP43阳性细胞数较模型组显著升高（P005）。结论：栝楼桂枝汤可促进脑缺血损伤大鼠肢体功能的恢复，该活性可能与其增加脑组织GAP-43蛋白的表达相关。 　　【关键词】栝楼桂枝汤；脑缺血；肢体功能；GAP-43 　　【中图分类号】R285【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）02-0044-03 　　Abstract： 　　Keywords： 　　缺血性脑卒中以高发病率、高致残率、高复发率己成为严重威胁人类生命与健康的主要疾病之一，超过三分之二的缺血性脑卒中患者遗留有不同程度的后遗症，严重影响生活质量[1]。目前，针对缺血性脑卒中后遗症尚无有效治疗药物，因此，研发可改善因脑缺血损伤所致的肢体障碍的药物具有重要的临床意义与应用前景。 　　栝楼桂枝汤出自张仲景《金匮要略》，用于治疗太阳病引起的痉挛及内伤杂病中出现的抽搐、发痉、手足蠕动等，福建中医药大学康复医院在临床实践中将该方运用于治疗脑卒中后肢体痉挛，重用栝楼根，取其清热生津、柔润筋脉之效，取得了显著的疗效[2-3]。本研究在大鼠脑缺血再灌注模型上观察栝楼桂枝汤对大鼠肢体功能障碍的作用，并通过观察该方对脑组织生长相关蛋白-43（Growth Associated Protein-43，GAP-43）表达的作用探讨栝楼桂枝汤治疗脑缺血的作用机制。 　　1动物与材料 　　11动物SD大鼠，雄性，280～300g，共21只，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司（许可证号SCXK（沪）2015-0002），光暗周期12/12 h（光照时间8：00～20：00）下饲养，自由饮食。 　　12材料中药饮片天花粉（批号：16031）、桂枝（批号：160402）、芍药、甘草（批号：160401）、大枣（批号：160401）购自福建中医药大学附属国医堂。兔抗GAP-43抗体（批号：ab16053，Abcam公司），免疫荧光封闭液、抗荧光淬灭封片剂等购自碧云天生物技术公司，其余试剂为国产分析纯。 　　2方法 　　21[JP2]大鼠局灶性脑缺血再灌注模型采用线栓法制作大脑中动脉闭塞/再灌注模型[4]。10%水合氯醛3mL/kg腹腔注射麻醉动物，钝性分离右侧颈总动脉（Common Carotidartery， CCA）、颈外动脉（External Carotidartery， ECA）和颈内动脉（Internal Carotid Artery， ICA），分别电凝ECA分支枕动脉和甲状腺上动脉。在距CCA分叉大约1cm处结扎ECA近心端，电凝远心端。夹闭CCA，在ECA残端距CCA分叉3mm处剪一小口，将MCAO线栓经ECA插入ICA，线栓头端距CCA分叉处约18mm，此时进线有轻微阻力，栓线正好插至颅内的大脑前动脉，堵住大脑中动脉（MCA）开口，制成MCAO模型。造模后2h，以半剂量10%水合氯醛再次麻醉动物，拔出线栓，结扎ECA残端。术后20～25℃条件下饲养大鼠，自由进食水。假手术组除不在颈内动脉插入线栓外，其余步骤与上述相同。[JP] 　　模型制作后按Longa神经功能缺失5分制评分标准[5]进行神经功能评分，评1～3分者为模型成功纳入标准。评分标准：0分：无明显神经缺损症状，活动正常；1分：提尾悬空时不能完全伸展左侧前爪；2分：行走时身体向偏瘫的左侧转圈，即追尾征；3分：行走时向偏瘫的左侧倾倒；4分：不能自发行走或清醒障碍。 　　22中药煎煮方法及动物分组给药栝楼桂枝汤煎剂由天花粉30g，桂枝9g，芍药15g，甘草6g，生姜9g，大枣12 枚组成。按药典方法进行显微鉴定和指标性成分含量测定，符合药典标准方可使用。中药饮片放入电药锅加入去离子水，以水面超过药物3～5cm为宜，浸泡40min后煎煮；先用武火烧开，再用文火煎熬20min；煎煮2次，合并2次煎液浓缩。根据动物体表面积等效剂量表计算，大鼠的灌胃剂量为生药量5g/kg体重。 　　SD大鼠随机分为假手术组、模型组和栝楼桂枝汤组，每?M7只，按上述方法造模，