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格列齐特中酰亚胺检测方法 　　摘 要：验证格列齐特中酰亚胺的检测方法适用于酰亚胺的控制。精密称取格列齐特样品约50mg置50ml容量瓶中，加流动相溶解稀释至50ml，摇匀。进样20ul，记录色谱图。检测波长：235nm，模式：等度，流速：1.0ml/min，柱温：25℃，注样量：20ul，走样时间：1.8倍格列齐特保留时间，流动相：乙腈--水-三氟乙酸-三乙胺（40：60：0.1：0.1）为流动相。按上述色谱条件和稀释步骤，对系统适用性试验、专属性、线性及范围、检测限、定量限、精密度、准确度项目进行验证，证明该检测方法适用于格列齐特中酰亚胺的检测。 　　关键词：格列齐特中残留酰亚胺的量 　　格列齐特是一种原料药，酰亚胺为格列齐特合成前一中间体，本检测方法为了考察酰亚胺是否在合成反应中完全反应，控制格列齐特中残留酰亚胺的量，通过对该分析方法的验证确保检测方法的准确、可靠。 　　一、验证条件 　　1 HPLC系统 　　U3000高效液相色谱仪：检测器： VWD-3100可变波长紫外检测器；泵： LPG-3400SD型高压输液四元泵；进样器：WPS-3000自动进样器；工作站： Chromeleon 6.8；色谱柱 ：大连依利特BDS C8 250*4.6 mm ；月旭材料科技（上海）有限公司C8 250*4.6mm，。 　　2 色谱系统 　　检测波长：235nm，模式：等度，流速：1.0ml/min，柱温：25℃，注样量：20ul，走样时间：1.8倍格列齐特保留时间，流动相：乙腈--水-三氟乙酸-三乙胺（40：60：0.1：0.1）为流动相。 　　3验证所使用的试剂与标准品 　　乙腈（色谱纯）、三氟乙酸（AR）、三乙胺（AR）、水（自制）、酰亚胺对照品（自制）、格列齐特（自制） 　　4验证项目和接受标准 　　系统适用性试验：标准溶液峰面积的RSD（n=6）RSD≤2.0%；理论塔板数（N） N≥10000； 　　拖尾因子（T） T≤1.5；分离度 （R） （酰亚胺与其他峰之间） R≥2.0； 　　专属性：目标峰和其他杂质无干扰，空白溶液图谱中目标峰出峰位置附近无显著干扰峰； 　　线性及范围：研究范围为：线性范围从定量限浓度开始50%-150%，共5个点，分别为：50%、80%、100%、120%、150%。列出酰亚胺浓度与峰面积的线性回归方程，要求相关系数不小于0.999； 　　检测限：信噪比S/N为3时测得酰亚胺的量； 　　定量限：信噪比 S/N为10时测得酰亚胺的量； 　　精密度：标准溶液重复进样6针，峰面积RSD不大于2.0%； 　　准确度（回收率）： 选取80%、 100%、120% 三种浓度，每一浓度配制3份，用9次测定结果评价方法的回收率， 各浓度水平的回收率应在80.0%～120.0%之间，各浓度水平内的回收率的RSD不大于2.0%，及各浓度水平回收率平均值之间的RSD 不大于2.0%。 　　酰亚胺含量应≤0.15%。 　　5 溶液配制 　　5.1空白溶液（流动相）：乙腈--水-三氟乙酸-三乙胺（40：60：0.1：0.1）。 　　5.2标准储备溶液（1）（浓度74.52μg/ml）： 精密称取酰亚胺37.26mg置50ml容量瓶中，用流动相溶解稀释至刻度，摇匀，精密量取稀释液5ml，用流动相溶解稀释至50ml，混匀得标准储备溶液。酰亚胺对照品溶液（1）（浓度1.4904μg/ml）：移取标准储备溶液1.0ml，置50ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀得标准定位溶液。 　　5.4线性测定溶液 　　取上述标准储备溶液（浓度74.52μg/ml）按照下列水平配制各水平线性溶液，分别精密量取0.5ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.5ml稀释至50ml容量瓶中，摇匀，即得。 　　5.5检测线、定量限及加样回收溶液 　　酰亚胺标准储备溶液（2）（浓度75.08μg/ml）：精密称取酰亚胺37.54mg置50ml容量瓶中，用流动相溶解稀释至刻度，摇匀，精密量取稀释液5ml，用流动相溶解稀释至50ml，混匀得标准储备溶液；酰亚胺对照品溶液（2）（浓度1.5016μg/ml）精密量取上述标准储备溶液1.0ml，置50ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀得酰亚胺对照品溶液；定量限溶液（浓度0.07508μg/ml）：精密量取酰亚胺对照品溶液1.0ml置20ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀做为定量限溶液；检测线溶液（浓度0.02252μg/ml）：精密取量定量限溶液3.0ml置10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀，得检测线溶液；加样回收溶液：称取供试品格列齐特原料130302批3份，50.20mg， 50.04mg，50.26mg分别置50ml容量瓶中