正交设计法优选亚麻籽饼粕中亚麻木酚素提取工艺.docVIP

正交设计法优选亚麻籽饼粕中亚麻木酚素提取工艺 　　摘要：通过对亚麻籽饼粕中开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷的提取工艺进行正交试验，并结合TLC结果，确定了提取溶剂为0.1mol KOH溶于1 L70％乙醇，料液比为1：8，提取5h。然后利用大孔吸附树脂与TLC相结合的方法，探讨了亚麻籽中SDG的分离纯化，并根据HPLC分析结果确定了最佳的分离纯化工艺条件。结果表明：KOH－乙醇－水提取与大孔吸附树脂相结合制备SDG提取物的方法与传统分离方法相比，得率高、工艺操作简单且安全无毒。 　　关键词：亚麻籽饼粕；亚麻木酚素；正交试验；薄层层析；高效液相 　　中图分类号：S563.2　文献标识码：A　文章编号：1006－6500(2008)02－0001－03 　　 　　木酚素(也称木脂素)是植物中含有的一类生理调节物质，可分为游离的脂溶性木酚素(Iigans)和含糖基的水溶性木酚素(lignan glucosides)。亚麻(Linum ustitatissimum Linaceae)籽种皮中富含木酚素类物质，其中以异落叶松树脂酚二葡萄糖苷(Secoisolariciresinol Diglucoside，简称SDG)为最主要的活性成分。SDG具有抑制人体乳癌细胞生长，减轻妇女绝经期症状，预防结肠癌、前列腺癌，增强自身免疫功能等作用。SDG的提取方法常见的是有机溶剂提取、超临界流体萃取、酶法提取、微波辅助提取法州等，但是这些提取方法，均没有考虑到SDG在亚麻籽饼粕中是与某些不确定成分结合成络合物而存在的，导致提取率很低或者根本提取不到SDG。本研究采用正交试验法优化KOH－乙醇－水提取SDG工艺，并与大孔吸附树脂相结合制备和纯化SDG提取物，可望提高工艺安全性和经济性，并为工业化分离纯化SDG提供理论依据。 　　 　　 　　1　材料和方法 　　 　　1.1材料与仪器 　　原料：亚麻籽饼粕由天津尖峰天然产物研究开发有限公司提供。主要仪器：shimadzu sCL-6A高效液相色谱仪(日本岛津公司)。化学试剂：SDG标准品由chromadex Inc提供；DM-21型大孔树脂，山东鲁抗树脂厂提供；乙醇、氢氧化钾为分析纯，甲醇为色谱纯。 　　 　　1.2试验方法 　　1.2.1树脂处理　将DM-21型大孔吸附树脂湿态装柱，用3BV的乙醇通柱处理，流速为2BV／h；水洗至无味或乙醇含量小于1％；然后用3BV的4％氢氧化钠溶液浸泡2 h，通柱，流速为2BV／h；水洗至pH为7；再用3BV的4％盐酸或硫酸溶液浸泡2h，通柱处理；水洗至pH 6-7，备用。 　　1.2.2SDG薄层层析(TLC)方法的建立　毛细管吸取样品溶液于硅胶板(GF254)上点样，吹干溶剂后，置于展开剂中展开完全。取出薄层层析板吹干，用硫酸乙醇溶液显色，计算比移值Rf。 　　1.2.3正交试验优化KOH－乙醇－水法提取SDG 　　(1)配制醇碱溶液 　　配制不同浓度的乙醇溶液(以酒精计)，根据乙醇量加入一定量的氢氧化钾，配成4％(W／V)浓度的氢氧化钾醇溶液。 　　(2)配制硫酸醇溶液 　　量取一定量浓硫酸，再加入一定量的无水乙醇，使其成为20％(V／V)的硫酸醇溶液。 　　(3)sDG提取正交试验 　　每份试验样品准确称取50.0g亚麻籽饼粕放入容器，采用L9(3)4做正交试验，按亚麻籽饼粕与醇碱溶液的不同比例(W／V)加入醇碱溶液，搅拌一定时间后，缓慢加入20％硫酸醇溶液中和，边加边测定溶液的pH值，使提取液的pH为7。过滤，滤渣用70％乙醇反复洗至流出液点TLC无显色为止，滤液浓缩(缩至无乙醇味)。试验因素与水平如表1。 　　1.2.4SDG粗提液的分离纯化将浓缩后的粗提液分别上树脂柱，继续用蒸馏水洗去杂质直至流出液清澈。用60％的乙醇溶液洗脱柱子，洗至流出液TLC检测无亚麻木酚素时停止。合并乙醇洗脱液，浓缩干燥。再将样品在100℃水浴中用无水乙醇反复回流，直至流出液TLC检测无亚麻木酚素时停止。合并溶液，浓缩干燥得纯化样品。 　　 　　1.2.5HPLC法测定SDG的含量色谱条件为KromasilC-18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；紫外检测波长280nm；柱温25℃；流速1.0mL／min；流动相，甲醇－水(20：80)，梯度洗脱，0～20min；进样量10μL。准确称取一定量SDG标准品，用甲醇配成浓度为1mg／mL的标准溶液，以2，4，6，8，10μL进样，绘制标准曲线。精密吸取每组样品溶液，进行测定。 　　1.2.6方法考察 　　(1)精密度试验 　　精确吸取同一供试样品溶液，相同液相条件下重复进样6次，每次10μL，进行HPLC分析。测得样品峰面积的标准偏差(RSD)为1.18％。 　　(2)