甲壳类水产品中并殖吸虫囊蚴检测和鉴定技术规范 征求意见稿.docVIP

ICS FORMTEXT 点击此处添加ICS号 FORMTEXT 点击此处添加中国标准文献分类号 FORMTEXT FORMTEXT 中华人民共和国 FORMTEXT 出入境检疫检疫行业标准 FORMTEXT SN/T FORMTEXT XXXXX— FORMTEXT XXXX FORMTEXT FORMTEXT 甲壳类水产品中并殖吸虫囊蚴检测和鉴定技术规范 FORMTEXT Protocol of detection and identification for metacercaria of Paragonimus in Crustaceans FORMTEXT 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 FORMDROPDOWN FORMTEXT FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX发布 FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX实施 FORMTEXT 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 SN/T XXXXX—XXXX PAGE \* MERGEFORMAT 9 前言 本标准依据GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》编写。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：上海出入境检验检疫局、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、广西大学。 本标准主要起草人：李树清 陈韶红 陈盈 黄维义 张永年 陈志飞 李雯雯 王巧全 张强 王艳 李健。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 甲壳类水产品中并殖吸虫囊蚴检测和鉴定技术规范 范围 本标准规定了并殖吸虫囊蚴的形态学、PCR检测和鉴定方法。 本标准适用于蟹、虾等甲壳类水产品中并殖吸虫囊蚴的检疫。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 SN/T 1193 基因检验实验室技术要求 概述 并殖吸虫俗称肺吸虫，主要寄生于人、犬、猫、鼠等哺乳动物的肺内。人食入生的、未煮熟的含有并殖吸虫囊蚴的蟹类、蝲蛄和沼虾等甲壳动物，或饮用含囊蚴的水而感染。目前世界上报道的并殖吸虫有50多种（包括同物异名、亚种及变种），中国报道有32种。现在公认的对人体致病的有8种: 卫氏并殖吸虫（P. westermani）, 斯氏并殖吸虫（P. skrjabini）, 宫崎并殖吸虫（P. miyazakii）, 异盘并殖吸虫（P. Heterotremus）, 非洲并殖吸虫（P. Africanus）, 双侧宫并殖吸虫（P. uterobilateralis）, 墨西哥并殖吸虫（P. mexicanus）, 肺并殖吸虫（P. pulmonalis）。并殖吸虫的分类、生活史、危害等参见附录A。 设备和材料 仪器和器材 生物显微镜（10×～400×）。 体视显微镜。 PCR扩增仪。 电泳仪。 凝胶成像系统。 超净工作台。 干热灭菌设备（烘箱）和湿热灭菌设备（高压灭菌锅）。 天平（感量0.1 g 锥形量筒（1000 mL)。 铜筛（40目） 高速台式离心机(最高离心力12000 g以上 微量可调移液器（2 μL～1000 μL）和相应吸头。 1.5 mL离心管和0.2 mL PCR反应管。 载玻片和盖玻片。 竹筒和竹棒。 试剂和溶液 琼脂糖。 溴化乙锭。 Taq酶（?5 U／μL）。 2.5 mmol/L dNTP。 25 mmol/L MgCl2。 10×PCR缓冲液(without Mg2+ )。 牛血清白蛋白（BSA）。 分子量指示物：100～2000 bp DNA marker。 抽提DNA试剂盒：QIAGEN公司或同类DNA提取试剂。 蛋白酶K。 70%酒精。 灭菌双蒸水。 Tris-乙酸电泳缓冲液（TAE）、琼脂糖凝胶、6×加样缓冲液（配制见附录B）。 引物 在并殖吸虫分类学的研究中，主要是通过对核糖体DNA的第二内转录间隔区（internal Transcribed spacer region 2，ITS2）基因序列来分析。本标准使用并殖吸虫的ITS2基因通用引物对所有并殖吸虫进行扩增。卫氏并殖吸虫是该属的模式种，是导致人体肺吸虫病的主要致病因子，可用卫氏并殖吸虫特异引物直接特异性扩增。 并殖吸虫的引物见表1。使用时用灭菌水配制成10 μmol/L。 表1 并殖吸虫引物序列及扩增片段长度 来源 引物名称 引物序列(5’--3 扩增片段大小（bp） ITS2基因通用引物 上游引物3S GGTAC CGGTG GATCA CTC