正常早孕与稽留流产绒毛组织结构中Bax和Bcl―2蛋白表达对比研究.docVIP

正常早孕与稽留流产绒毛组织结构中Bax和Bcl―2蛋白表达对比研究 　　【摘要】 目的 研究凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax在正常早孕与稽留流产绒毛组织结构中的表达及其意义， 探讨稽留流产原因。方法 选择本院就诊的稽留流产患者和早孕人工流产患者各60例， 分为A组、B组。流产后立即留取胚胎绒毛组织送病理。分别应用光镜观察各组绒毛组织细胞形态结构的改变；同时应用免疫组织化学方法和计算机图文分析系统检测Bax、Bcl-2在各组绒毛的表达及细胞凋亡情况。结果 稽留流产组绒毛滋养细胞中凋亡指数为（33.32±0.79）%， 明显高于对照组B组的（18.90±0.63）%， 差异有统计学意义（P0.01）。Bax和Bcl-2在两组合体滋养细胞中的阳性率比较显示， 稽留流产组中Bax阳性率增高， Bcl-2阳性率下降， Bcl-2/Bax比值降低， 差异均有统计学意义（P0.01）。结论 蜕膜绒毛中Bax阳性率增高和Bcl-2阳性率下降可使绒毛合体滋养细胞凋亡明显增加， 并进一步导致稽留流产发生。 　　【关键词】 Bax蛋白；Bcl-2蛋白；胎盘绒毛；稽留流产；免疫组织化学 　　稽留流产又称过期流产， 是由于早期妊娠失败导致孕卵死亡的一种常见疾病， 发病率高。目前认为可能的病因有：胚胎染色体异常、母体严重感染、生殖器官异常、内分泌异常、免疫功能异常、不良环境因素等。其确定的机制仍然不清。由于病因尚不明确， 无有效的对症预防治疗方法， 给很多患者带来了很大的痛苦， 也给临床医师带来了很大的困惑。细胞凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B型白细胞/2型淋巴细胞样蛋白（ Bcl-2） 是与细胞凋亡有关的基因，也是目前最受重视的调控细胞凋亡的基因家族。目前国内外对其在很多组织中的表达有所研究， 但对稽留流产绒毛组织中的表达目前国内尚未见报道。对正常早孕与稽留流产绒毛组织结构中Bax、Bcl-2的表达进行对比研究， 探讨两者之间的异同点及Bax/Bcl-2的平衡对维持正常妊娠的作用， 研究稽留流产绒毛组织结构中Bax、Bcl-2的表达是否异常， 了解是否其表达异常是稽留流产原因之一， 可以帮助寻找稽留流产病因， 为最终找到预防稽留流产的突破口奠定基础。 　　1 资料与方法 　　1. 1 一般资料 选择本院就诊的稽留流产患者和早孕人工流产患者各60例， 分为A组（稽留流产组）和对照组B组（人工流产组）。A组年龄24～36岁， 平均（27.31±3.58）岁， 妊娠时间（56±5） d；B组年龄21～37岁， 平均（27.43±3.83）岁， 妊娠时间（55±4） d；其年龄、妊娠时间、孕产次数差异无统计学意义。均未放置宫内节育器， 流产前均未应用任何药物， 无发热、急性炎症等表现。均经B超确诊宫内正常早孕或稽留流产。 　　1. 2 方法 　　1. 2. 1 标本采集 流产后立即留取肉眼可见的胚胎绒毛组织， 中性福尔马林固定、制成病理切片。分别应用光镜观察各组绒毛组织细胞形态结构的改变；同时应用免疫组织化学方法和计算机图文分析系统检测Bax、Bcl-2在各组绒毛的表达及细胞凋亡情况。 　　1. 2. 2 方法 4 μm厚病理切片连续切片3张。一张用光镜观察各组绒毛组织细胞形态结构的改变， 两张行免疫组化染色。采用SP法， 微波炉枸椽酸盐抗原修复， DAB显色。每批染色均设阳性和阴性对照， 严格按试剂盒推荐方法染色。每张切片观察5个视野， 计算出每100个滋养细胞的凋亡率。 　　1. 2. 3 结果判定 Bcl-2和Bax阳性反应均为胞浆、胞膜着棕黄色颗粒。细胞无黄色颗粒为阴性（-）， 阳性细胞数在5%～25%为弱阳性（+），阳性细胞数在25%～50%之间为阳性（++）， 阳性细胞数在50%～75%之间为阳性（+++）， 75%为强阳性（++++）。 　　1. 2. 4 统计学方法 运用SPSS13.0软件进行统计学分析。所得数据以均数±标准差（ x-±s） 表示。P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2. 1 光镜结果 自然流产组绒毛组织结构清晰， 外层为合体滋养细胞， 内层为细胞滋养细胞， 排列紧密， 稽留流产组中的绒毛滋养层细胞变性、坏死， 甚至脱落， 间质扩张水肿， 细胞分散， 血管扩张， 并可见炎性细胞浸润。两组滋养细胞凋亡指数比较，稽留流产组绒毛合体滋养细胞中凋亡指数与对照组比较显著增加， 差异有统计学意义（P0.01）， 结果见表1。 　　2. 2 免疫组化结果 Bax在蜕膜绒毛中的阳性表达主要位于合体滋养细胞和细胞滋养细胞的胞浆中， Bcl-2主要分布于绒毛合体滋养层的胞质内。两组滋养细胞Bcl-2、Bax阳性率及Bcl-2/Bax比值比较， 稽留流产组合体滋养细胞中Bcl-2阳性率较对照组低