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核桃苯丙氨酸解氨酶基因克隆与序列分析
核桃苯丙氨酸解氨酶基因克隆与序列分析
(1．长江大学园艺园林学院，湖北 荆州 434025；2．黄冈师范学院生命科学与工程学院，湖北 黄州 438000)
摘要：利用1对兼并引物，从核桃(Juglans regia)中克隆得到苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因cDNA片段，并命名为JrPAL，GenBank登录号为AY747676#65377;JrPAL长866bp，编码289个氨基酸#65377;通过核苷酸和蛋白质序列多重比较，发现JrPAL与其他植物的PAL基因高度同源#65377;JrPAL编码的蛋白质序列包含与水稻#65380;玉米PAL蛋白质相同的脱氨基位点和催化活性位点#65377;PAL系统进化树表明，JrPAL与乔木类植物的PAL基因聚类关系最近#65377;克隆JrPAL，可为利用基因工程技术调控核桃黄酮化合物的代谢提供基因资源#65377;
关键词：核桃；苯丙氨酸解氨酶基因；基因克隆；序列分析
中图分类号：S664．1；Q785文献标识码：A文章编号：0439－8114(2008)06－0622－03
Molecular Cloning and Sequence Analysis of A Phenylalanine Ammonia－lyase Gene from Juglans regia
WANG Yan1， ZHANG Feng－xia1，ZHU Jun1，LI lin－ling2， XU Feng1，CHENG Shui－yuan2
(1．College of Horticulture and Gardening， Yangtze University， Jingzhou 434025， Hubei， China；
2． College of Life Science and Engineering， Huanggang Normal University， Huangzhou 438000， Hubei， China)
Abstract： A phenylalanine ammonia－lyase (PAL) gene cDNA was cloned from Juglans regia using a pair of degenerated primers． The PAL cDNA fragment of J． regia (designated as JrPAL) was 866 bp length and it encoded a 289 amino acid protein． JrPAL was found to have extensive homology with those of other plant PAL genes via multiple alignments． The deamination sites and catalytic active sites in PAL protein of Oryza sativa and Zea mays were also found in JrPAL． Phylogenetic tree analysis revealed that JrPAL had closer relationship with PALs from arbor plants than from other plants． JrPALwas a useful tool to study the regulation of flavonoid metabolism in J． regia．
Key words： Juglans regia； JrPAL； molecular cloning； sequence analysis
类黄酮与酚类物质是植物体内的主要次生代谢产物，其在植物体内的积累受到众多环境因子的影响[1]#65377;目前，黄酮生物合成途径研究得很清楚[2]，已经鉴定和分离出黄酮合成过程中的各种酶及基因，该途径的第一个反应是苯丙氨酸解氨酶(PAL，EC 4．3．1．5)催化苯丙氨酸生成反式肉桂酸，苯丙氨酸解氨酶是苯丙氨酸代谢途径的关键酶#65377;由于PAL在类黄酮#65380;木质素#65380;植物抗霉素生物合成代谢途径中具有重要的作用，有关研究已有许多报道[3－6]#65377;大量研究表明不同环境因子例如光照#65380;低温#65380;真菌感染#65380;机械创伤都会对PAL酶活性的表达起着调控作用[6－8]#65377;PAL基因已从裸子植物#65380;草本植物和木本植物等多种植物中克隆得到[9－16]，基因拷贝数分析表明，
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