液相色谱法一次性检测多种甜味剂测定研究.docVIP

液相色谱法一次性检测多种甜味剂测定研究 　　摘 要：本文建立了同时测定六种人工合成甜味剂阿斯巴甜、糖精钠、甜蜜素、安塞蜜、纽甜、甜菊糖甙的高效液相色谱分析方法，以Platicil ODS柱为分离柱，20mmol/L硫酸铵缓冲溶液（pH4.4）-乙腈为流动相，进行梯度洗脱，采用二极管阵列检测器进行检测，整个分离过程在30min内完成。样品加标回收率为85%～107%；相对标准偏差小于3.2%。该法可用于食品中六种甜味剂的同时测定。 　　关键词：高效液相色谱法；人工合成甜味剂；测定研究 　　一、前言 　　甜味剂是对能够赋予食品甜味的物质的总称。由于糖精钠（SA）、甜蜜素（SC）、安赛蜜（AK）、阿斯巴甜（ASP）、纽甜（NTM）、甜菊糖甙（S）等人工合成甜味剂具有高效、经济等优点，因此在食品中被广泛应用。但过量使用会造成一定的毒副作用。例如甜菊糖甙可能有一定的致癌作用；阿斯巴甜可影响苯丙酮尿病患者的发育；长期食用糖精钠会导致营养不良，其致癌可能性尚未完全排除；甜蜜素可能有致癌性，其代谢产物环己胺对心血管系统和睾丸有毒理作用。近年来发现有些商家对人工合成甜味剂的泛滥使用以及一些食品标签中未注明使用人工合成甜味剂，有些则以“糖蜜素”“甜味料”“蛋白糖”等混淆视听，以掩盖其产品的危害性，对消费者的身体健康构成危害，严重侵犯了广大消费者的利益。 　　二、实验部分 　　1.仪器与试剂 　　Agilent HP1100高效液相色谱仪（配有四元梯度泵、在线真空退气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器DAD，美国安捷伦科技有限公司），AS3120A超声波振荡器（奥特塞恩斯仪器有限公司），pHS-3E型精密pH计（上海精密科学仪器有限公司），Platicil ODS色谱柱，SIGMA 3K15离心机，BP211D电子天平（Sartorius），ProElut PXC固相萃取柱。糖精钠（购置国家标准物质研究中心）、甜蜜素（Sigma公司产品）、安塞蜜、阿斯巴甜、甜菊糖甙、纽甜均为Supelco公司产品，乙腈（色谱纯），硫酸铵（优级纯）；其余试剂均为分析纯；实验用水为超纯水系统制备。 　　2.色谱条件 　　色谱柱：ODS-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为20mmol/L硫酸铵（用H3PO4调pH至4.4）-乙腈；梯度洗脱程序：乙腈：0～2min，5%；2～30min，5%～50%；流速0.8mL/min；柱温为30℃；检测波长为200nm，226nm；进样量为20μL。 　　3.样品前处理 　　所有样品均为市场采集的样品，按照品种将其分为饮料、蜜饯、酱腌菜、酒类等，其中饮料按照国家标准进一步分为碳酸饮料、果汁、茶饮料、含乳饮料、植物蛋白饮料和固体饮料。 　　（1）介质简单的样品。例如碳酸饮料、果酒、葡萄酒等，称取10g样品（精确至0.001g），置于25mL容量瓶中，用水定容（如有乙醇需水浴加热除去乙醇后再用水定容至原体积）至刻度，混匀，经0.45μm滤膜过滤，滤液待上机测定。 　　（2）介质复杂的样品。如茶饮料、果汁等，称取6g样品（精确至0.001g），置于25mL容量瓶中，用水定容至刻度，4000r/min离心10min，取上清液，以下操作按2.4。 　　（3）介质为固体的样品。例如蜜饯、酱腌菜等，将样品粉碎，称取2g样品（精确至0.001g），称取适量置于25mL，加水后并超声振荡20min，加水定容至25mL。4000r/min离心10min，取上清液，以下操作按2.4。 　　（4）含乳饮料和植物蛋白饮料。称取6g样品（精确至0.001g），置于25mL容量瓶中，依次加入2mL0.08mol/LK4[Fe（CN）6]（4.4）和2mL0.25mol/L乙酸锌（4.5）溶液，剧烈振荡2min，以沉淀蛋白质，加水定容至刻度，4000r/min离心10min，取上清液，4000r/min离心10min，取上清液，以下操作按2.4。 　　4.试样的净化 　　取上清液3mL经固相萃取柱（事先经3mL乙腈活化，再用3mL水平衡）萃取。然后依次用3mL20mmol/L硫酸铵和3mL乙腈洗脱，收集洗脱液于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，经0.45μm滤膜过滤，滤液待上机测定。 　　5.测定 　　取处理液与混合标准使用液各20μL注入高效液相色谱分析仪进行分离，以保留时间定性，峰面积进行外标法定量。 　　6.计算公式 　　样品中糖精钠、甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、甜菊糖甙、纽甜含量（X）以毫克每千克（mg/kg）或毫克每升（mg/L）表示，按式①计算。其中糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、甜菊糖甙、纽甜按200nm波长下的峰面积计算；安赛蜜按226nm波长下的峰面积计算：X=×C×K×…………式①