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液相色谱仪工作原理及常见故障分析 　　摘 要：液相色谱仪是指利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。本文简单介绍了其工作原理及常见故障分析。 　　关键词：液相色谱仪 进样系统 输液系统 分离系统 检测系统 数据处理系统 　　一、简介 　　液相色谱以液体作为流动相的色谱分离方法。适用于高沸点，大分子，强极性和热稳定性差的化合物分析。流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用。 　　高效液相色谱法（HPLC）是目前应用广泛的分离、分析、纯化有机化合物（包括能通过化学反应转变为有机化合物的无机物）的有效方法之一。 在已知的有机化合物中，约有80%能用高效液相色谱法分离、分析，而且由于此法条件温和，不破坏样品，因此特别适合高沸点、难气化挥发、热稳定性差的有机化合物和生命物质。 HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部位。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、与柱或保护住、柱温控制器等，现代HPLC仪还有微机控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。 　　由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。 　　二、工作环境 　　①避免强烈振动；②避免阳光直射；③湿度小于等于80%；④温度在5℃-40℃之间；⑤避免强大的电场或磁场；⑥仪器表面不防水，若有水溅上，应立即擦去。 　　三、工作原理 　　液相色谱系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统。简易流程图如下： 　　1、溶剂 　　（1）溶剂的选择 　　流动相的选择： 　　①采用“HPLC色谱”级溶剂；②避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂；③对试样有适宜的溶解度；④溶剂粘度小；⑤与检测器匹配。 　　缓冲液的使用： 　　①尽可能使用高级别纯度的化学试剂配制；②使用前必须过滤；③使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀，磨损，阻塞；④用纯水冲洗30min-60min（1ml/min），再用甲醇冲洗30min；⑤易受到细菌和霉菌的影响。 　　（2）溶剂的处理 　　1）过滤：0.45um或更小孔径滤膜，目的是除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱尤其是使用无机盐配制的缓冲盐。 　　2）脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡。 　　①泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积；②柱中气泡使流动相绕流，使峰变形；③检测器中的气泡会产生基线波动。 　　2、柱塞泵 　　柱塞泵包括串联式柱塞往复泵和并联式微体积柱塞往复泵。 　　3、进样器 　　进样器包括自动进样器和手动进样器，手动进样器的注入方式分为全量注入和部分注入。部分注入：一般要求进样量最多为定量环体积的一半，如20μl的定量环，最多进样10μl的样品，并且要求每次进样体积准确、相同。全量注入：进样量最少为定量环体积的3至5倍，即20μl的定量环最少进样60至100μl的样品，这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。 　　4、柱温箱 　　使用柱温箱，可使分析结果重现性好；提高柱效；降低柱压；保证检测稳定性。 　　5、检测器 　　原理是基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收。其优点：灵敏度高；对温度和流速不敏感；可用于梯度洗脱。缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质。 　　常用的检测器类型：紫外检测器（包括二极管阵列检测器）、荧光检测器、示差折光检测器、电导检测器、蒸发光散射检测器、质谱检测器。 　　四、常见故障分析 　　1、流动相不能流动或输液管中有较多连续的气泡产生 　　1）吸滤头堵塞，将吸滤头用异丙醇（或5%稀硝酸），超声波清洗，再用蒸馏水清洗。 　　2、压力波动大或泵不送液 　　1）单向阀堵塞，拆下单向阀，把它放入异丙醇（甲醇）或水中，用超声波清洗15min。注意不要将单向阀倒置。否则内部的阀心可能会掉落。 　　3、压力波动并伴随泵头处漏液 　　1）柱塞杆密封磨损，更换密封圈； 　　2）柱塞杆磨损或折断，更换柱塞杆。 　　4、压力很高，泵后无负载流速1ml/min时，压