淡紫灰链霉菌X33发酵产物毒性试验评价.docVIP

淡紫灰链霉菌X33发酵产物毒性试验评价 　　摘要：利用小白鼠进行急性和亚急性经口毒性试验，研究抑制柑橘绿霉病菌的淡紫灰链霉菌菌株X33无菌发酵液对小鼠的毒性，并测定小白鼠血常规指标，观测小鼠主要脏器。结果表明，菌株X33无菌发酵液的小鼠LD5010.0 g/kg，受试物属于无毒级物质；小白鼠经28 d喂养，各试验组小白鼠生长发育良好，体质量、食物利用率及血常规与对照组之间无显著差异；对小白鼠肝、肾、脾、胃、肠、十二指肠、睾丸（或卵巢）等主要脏器进行组织解剖，均未见病变。淡紫灰链霉菌菌株 X33无菌发酵液对小鼠安全、无毒。 　　关键词：淡紫灰链霉菌X33；无菌发酵液；毒性试验；小白鼠；血常规 　　中图分类号： S182 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2015）03-0275-02 　　柑橘采后损失主要由霉菌、酵母菌、细菌等病原菌侵染造成，其中，柑橘青霉病和绿霉病是柑橘采后主要的两大贮藏病害。据统计，由于青霉病和绿霉病感染导致的柑橘采后损失率为30%～50%[1]。目前，柑橘采后病害主要使用化学药剂进行防治，这容易污染环境，使病原菌产生抗药性，防病效果降低[2]。此外，频繁和高浓度使用化学药剂，不仅会影响果实的自然风味和质构，果实表面还会存在残留，威胁消费者的健康和安全。 　　生物防治是采用微生物菌株或抗生素类物质，通过喷洒或浸渍果实处理，以降低或防治果实采后病害的保鲜方法，高效、无毒、生产成本低廉，是未来的发展方向[3]。江西南昌市发酵应用技术重点实验室以柑橘绿霉病菌为靶标，开展菌株的分离和筛选研究，从土壤中分离筛选到1株淡紫灰链霉菌（Streptomyces lavendulae），命名为淡紫灰链霉菌X33，其产生的生物活性物质对柑橘绿霉病菌、柑橘青霉病菌、柑橘酸腐病菌等多种病原菌均有较强的抑制活性，有望开发为新型的柑橘采后防腐剂。本研究通过对淡紫灰链霉菌X33发酵液进行毒理学试验，旨在探讨淡紫灰链霉菌X33发酵液的使用安全性，为其进一步开发利用奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 菌株 淡紫灰链霉菌X33，由江西省南昌市发酵应用技术重点实验室分离得到。 　　1.1.2 受试物 淡紫灰链霉菌X33在28 ℃、200 r/min下摇瓶发酵培养3 d，发酵液经6 000 r/min离心10 min，上清液用0.45 μm滤膜过滤，即得无菌发酵液。 　　1.1.3 试验动物及试剂 远交昆明小鼠，自南昌大学医学院购买；所用试剂均为分析纯。 　　1.2 方法 　　1.2.1 急性经口毒性试验 选用体质量为18～22 g的小白鼠20只，分2个试验组，每组雌雄各5只，采用一次性经口灌胃方式，灌胃菌株X33无菌发酵液20 mL/kg，剂量相当于 10 g/kg；另取10只小白鼠（雌雄各半），给清水作为对照。小鼠首次饲喂时，隔夜空腹，禁食16 h，仅喂水；试验前先正常饲喂3 d，使其适应试验环境。灌胃后，连续14 d观察小白鼠的行为状况、中毒症状，记录各组实验小鼠死亡数，并及时剖检并记录结果。 　　1.2.2 亚急性经口毒性试验 选小白鼠80只，随机分为4组，每组20只，雌雄各半。试验设灌胃菌株X33发酵液1、05、0.01 g/kg共3个剂量组，以灌胃蒸馏水为对照组。每天观察并记录各组小白鼠的体征表现、行为、中毒症状和死亡情况[4]。自由进食饮水，每周称量1次体质量，记录饮水量、食物摄入量，计算食物利用率[5]。 　　1.2.3 发酵液对小白鼠血常规指标和主要脏器的影响 亚急性经口毒性试验结束，从每笼中随机抓取3只小白鼠，颈椎脱臼法处死，立即用注射器插入心脏采集血液，分析血液生化指标，并同时进行组织解剖检查。 　　2 结果与分析 　　2.1 急性经口毒性试验 　　试验期间，各试验组小白鼠饮食和活动正常，生长发育良好，体质量有所增加，未见任何明显中毒表现，也无死亡；小白鼠喂养14 d进行解剖，肉眼观察其心、肝、脾、肺、肾、肠等脏器，与对照组相比，皆未发现明显病变和差异。紫灰链霉菌X33无菌发酵液的饲喂剂量达10 g/kg时不会引起小白鼠死亡，按现行2005年《化学品毒性鉴定技术规范》急性经口毒性试验的毒性分级标准[6]划分，受检物属于无毒级物质。 　　2.2 亚急性经口毒性试验 　　2.2.1 一般观察结果 喂养28 d，对照组与喂养组小白鼠均未出现死亡现象，各处理组小白鼠的生长状况、行为状态、外观体征、饮食和排便等均与对照组差异不明显，淡紫灰链霉菌X33无菌发酵液对小白鼠生理功能损害不明显。 　　2.2.2 喂养28 d的小白鼠进食量和食物利用率 由表1可知，各处理组与对照组之间差异不显著（P0.05），淡紫灰链霉菌X33无菌发酵液喂养小白鼠，对小白