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粪肥对不同类型土壤中沙门氏菌存活动态影响 　　摘要：猪粪和鸡粪是沙门氏菌的主要传播载体。主要探讨了猪粪和鸡粪对土壤中沙门氏菌存活行为的影响，为防控土壤沙门氏菌污染和人畜共患疾病的暴发提供参考。研究采集了5种南方典型农业土壤，通过添加猪粪和鸡粪2种粪肥，利用室内培养试验，开展了沙门氏菌在土壤中的存活试验，探讨其存活影响因素。结果表明：（1）添加猪粪和鸡粪的供试土壤中沙门氏菌浓度随着时间变化的趋势在培养初期有1个先升高后逐渐衰亡的过程。（2）添加猪粪土壤（21.11～45.26 d）中沙门氏菌的存活时间明显长于添加鸡粪的土壤（14.33～34.94 d），说明猪粪比鸡粪更能促进沙门氏菌在土壤中的存活。（3） 土壤pH值（r=0.829）、有机碳含量（r=0.567）、总氮（r=0.466）和钾含量（r=0429）是影响粪肥添加土壤中沙门氏菌存活的最重要因素。 　　关键词：猪粪；鸡粪；土壤；沙门氏菌；存活动态 　　中图分类号： S182文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2017）05-0297-04 　　近几十年来，我国畜禽集约化养殖业迅速发展，畜禽数量飞速递增，在有效解决了人类饮食需求的同时，粪便的排放量也在增加，带来严重的环境污染[1]。资料显示，每年全国畜禽粪便年排放量达到40 亿t，已成为与工业废水、生活污水相并列的三大污染源之一[2-3]。目前，大量畜禽粪便没有得到充分有效的利用，还有很多被随意排放到自然环境中，使土壤、水体及大气等自然环境受到了严重的污染[2-4]。 　　畜禽粪便含有大量的病原微生物和寄生虫卵，畜禽粪便未经无害化处理施入农田后，病原微生物可以通过食物链进入人体，引发食源性疾病[5-7]。据统计，在世界各国的细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒排列榜首，我国内陆地区也以沙门氏菌为首位[8]，进食被沙门氏菌污染的食品可引起伤寒、腹泻及肠道炎症反应，甚至死亡[6，9]。牛、 羊、狗和鸡等动物是沙门氏菌的天然宿主，带菌动物粪便是沙门氏菌污染环境、食品的主要来源，人类通过接触畜禽粪便和食用污染土壤中的蔬菜水果等间接受到感染[9-10]。据调查，沙门氏菌在畜禽粪便和土壤中的存活时间可长达几个月，然后通过地下水、植物等进入食物链[11-12]，因此，研究畜禽粪便中沙门氏菌在土壤中的存活对土壤生物污染能力的评估和管理对人类的健康极为重要。目前，对于沙门氏菌通过畜禽粪便进入土壤后的环境行为等相关研究尚处于起步阶段，且我国很少见沙门氏菌在农业与环境中存活的研究报道。因此，研究沙门氏菌在粪肥添加土壤中的存活动态对于沙门氏菌引起的土壤生物污染的评估、控制、预防和修复技术具有重要意义。 　　1材料与方法 　　1.1供试菌株 　　供试病原菌为革兰氏阴性沙门氏菌，沙门氏菌抗利福平驯化浓度为120 μg/mL，其最适生长温度为 37.0 ℃。-80.0 ℃ 保存的沙门氏菌37.0 ℃培养活化后，与脑心萃取液培养基（添加100 μg/mL利福平）中恒温振荡培养（37.0 ℃，250 r/min）12 h 至沙?T氏菌达到对数生长期初期，无菌磷酸缓冲液多次离心洗净沙门氏菌表面的培养基，无菌水稀释一定倍数后用紫外分光光度计测定其浓度，调节菌液浓度至沙门氏菌浓度为 1.0×107 CFU/mL。 　　1.2供试粪肥 　　供试粪肥分别为猪粪和鸡粪。猪粪和鸡粪采集自福建福州闽侯养殖场，猪粪和鸡粪均为未经堆肥的新鲜粪肥，风干研磨过筛后备用。猪粪和鸡粪基本理化性质参照南京土壤研究所编的《土壤农化分析》进行分析，基本理化性质见表1。 　　1.3供试土壤 　　供试土壤为福建省主要农业土壤，包括水稻土、红壤、黄壤、紫色土和风沙土。每个土壤均采集了3个重复样品，每个样品均为S形多点采集土壤表层土层（0～20 cm）的混合样，去除植物根系与碎石块，新鲜样品采集后用冰袋包装带回实验室马上过 2 mm筛，一部分样品 4 ℃冰箱中保存，加入适当比例的猪粪和鸡粪，用于接种沙门氏菌进行存活试验，同时测定添加猪粪和鸡粪后土壤的物理化学性质，另一部分风干后过 2 mm筛土样，用于土壤物理化学性质测定。土壤理化性质参照南京土壤研究所编的《土壤农化分析》进行分析。猪粪和鸡粪添加前后土壤物理化学性质见 　　沙门氏菌至添加猪粪和鸡粪的土壤中，接种土壤中沙门氏菌的最终浓度为106 CFU/g，25 ℃恒温培养箱中避光培养，在培养过程中通过测定土壤的质量来调节土壤含水量的恒定。试验同时进行3个平行和空白处理。培养 0、 1、 2、 3、 5、 7、 10、 15、 20、 25、 30 、 35 、 40 、45、55、65 d后，采样测定土壤中沙门氏菌活细胞的浓度：0.1%蛋白胨缓冲液混匀采样土壤，土壤悬浮液逐级稀释到适当浓度，涂抹至